进口牛用B超机做活体采卵的步骤
时间:2018-06-11 阅读:2252
采卵之前,先往收集管中注入5mLPBS+肝素液(5mg/mL),置恒温槽中,温度37℃,将长针与导管用PBS+肝素液冲洗2遍后准备采卵。母牛站立保定,操作人员对牛进行直肠检查,并掏净直肠内的粪便;清洗外阴,并用0.1%新洁尔灭消毒外阴,然后将采卵针的探头插入到阴道深部,到达阴道穹窿后,根据所要穿刺的卵巢左侧还是右侧而把探头放在穹窿的相应一侧。操作人员一手持探头,另一手在直肠内隔着直肠壁将卵巢牵引至贴在探头端部。
在进口牛用B超机监视器上能清楚看到卵巢,然后上下左右翻转卵巢,根据图像区分及确定卵泡数和黄体,并把卵泡进行分级,卵泡直径2~5mm为小卵泡,5~10mm为中卵泡,大于10mm的卵泡为大卵泡,然后调整卵巢和探头位置,使监视器上卵泡位于穿刺引线上之后,推进穿刺针,对卵泡进行穿刺。同时用脚踏开关控制真空泵抽取卵泡液,真空泵压力在35~60mm汞柱之间调整;从监视器上可观察到被抽取卵泡液的卵泡开始缩小,变得不规则,直到卵泡液被*抽取,卵泡在监视器上消失,退出穿刺针,再对第二个卵泡进行穿刺,抽取卵泡液,直到该卵巢上2mm以上的卵泡均被穿刺后,换另一侧卵巢,同法处理。
然后用PBS+肝素液冲洗采卵针及导管,冲洗液也放入收集管,将采得的卵泡液用胚胎收集滤杯过滤,卵母细胞在滤杯中,用PBS液反复冲洗几遍,将滤杯中的卵母细胞倒入表面皿中,在体视镜下进行观察、检卵。将检出的符合要求的卵母细胞放进成熟液中,在5%CO2和39℃温度的培养箱中进行成熟培养。