使用安捷伦液相色谱柱前要了解什么?
时间:2020-03-28 阅读:739
在安捷伦液相色谱柱使用前要仔细阅读色谱柱附带的说明书,注意适用范围,如pH值范围、流动相类型等;必须使用保护柱;色谱柱长时间不用时,柱内应充满溶剂,两端封死保存。
溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎,在更换流动相时注意保护,当发现过滤头变脏或长菌时,不可用超声洗涤,可用35%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤。
流动相使用前必须过滤,不要使用多日存放的蒸馏水。
检测器的灯有使用寿命限制,一般在正式进样分析前30min左右开启D灯或W灯,分析结束,立即关灯。仪器运行时,泵头必须用10%异丙醇水溶液虹吸冲洗,不能干涸。
注意各流动相所剩溶液的容积设定,若设定的容积低于zui低限会自动停泵。
对于手动进样器当使用缓冲溶液时要用水冲洗进样口同时搬动进样阀数次每次数毫升
若使用含盐流动相,开机时必须先用10%甲醇水溶液冲洗20分钟以上再换上含盐流动相。
在使用安捷伦液相色谱柱之前,还要先了解样品和杂质的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等相关内容。
样品是极性的且弱酸性的;就可以选择C18在100%酸性水溶液条件下检测,即要选择承受100%纯水且对极性化合物保留很好的色谱柱。如果样品极性太强,或酸性太强;可以选择CN,NH2,或硅胶柱,也有使用C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱,缺点是离子对试剂平衡时间长,对流动相pH要求比较精密,否则很难重复实验,另外离子对试剂很难洗下来,基本上用了离子对的色谱柱就不能再用于其它实验。
如果样品是碱性的;可选择高纯硅胶柱(高纯硅胶缺少金属杂质,且硅胶端基封尾)或一些经过修饰的C18柱(如极性嵌入技术或碱去活技术等),他们都会减少碱性化合物的拖尾,一般会选择中性或偏碱的条件下做,因为这样可增加碱性样品的保留。
如果碱性化合物的酸性太强,或碱性太强;可以选择宽pH的C18色谱柱在高pH值检测(优点是方法开发简单,缺点是目前实现这一技术的色谱柱品牌比较少,价格也高)或者选用HILIC色谱柱,选择强离子交换柱,也有使用C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱。