1. 产品照片 (包括管壁的批次号、管底的二维码的清晰照片)

2. 请提供您的实验结果并描述出现的问题

注意：

· 请在结果图片中标注准确的蛋白marker位置和大小，并标注每个泳道的样品信息；

· 请附上内参蛋白的检测结果；

· 请用文字语言准确地描述实验中出现的问题。

目标蛋白出现了两至三条蛋白条带，且MDA-MB-231细胞中有表达psma蛋白，但pc3细胞应该低表达甚至不表达psma蛋白，却出现了假阳。

3. 产品储存 (温度和分装)

· 储存温度: -20摄氏度

· 是否进行分装及分装后每管的体积: 未进行分装

4. 检测的样品

· 样品种属信息（Human/Mouse/Rat etc.）：Human

· 如果检测样品为细胞系，请提供细胞系名称：mda-mb-231细胞，pc3细胞

· 如果检测样品为组织，请提供组织名称：

· 是全细胞裂解液还是某一亚细胞组分裂解液：全细胞裂解液

5. 裂解液

· 上样的蛋白总量（μg/lane）： 10-15μg

· 裂解缓冲液类型： RIPA裂解液

· 蛋白酶抑制剂：磷酸酶抑制剂混合物，蛋白酶抑制剂混合物

上样缓冲液成分：


· 煮样温度和时间：100摄氏度，10min

6. 电泳和转膜

电泳 ：

· 使用变性胶（SDS-PAGE）还是native胶（native-PAGE）：SDS-PAGE

· 分离胶浓度：8%

转膜：

· 转膜方法（湿转/半干转 etc.）：湿法

· 转膜电流/电压和转膜时间：300mA，2h

· 是否用丽春红染色检查过转膜效率？若有，请提供实验图片：否

7.  封闭条件

· 封闭剂成分（脱脂牛奶/BSA etc.）和浓度：5%脱脂牛奶

· 封闭时间和温度：室温，2h

8.  一抗

· 一抗稀释比例：1:1000

· 抗体稀释液：TBST

· 孵育时间和温度：4摄氏度，10-12h

· 洗液成分（请注明Tween的含量）：TBST, 每1LTBS(1X)加入500μl Tween20

· 洗膜具体步骤：每次10min，洗3次

9.  二抗

· 产品名称：Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)HRP

· 品牌与货号：南京翼飞雪生物科技有限公司  YFSA02

· 二抗稀释比例：1:5000

· 孵育时间和温度：室温，2h

· 洗液成分（请注明Tween的含量）:TBST, 每1LTBS(1X)加入500μl Tween20

· 洗膜具体步骤：每次10min，洗3次

· 是否与其它一抗搭配使用没有问题? 如果是， 请提供相关实验结果：与其它一抗搭配使用没有问题

是

10. 检测

· ECL/ECL+/其它检测方法-请说明：ECL

11. 是否使用阳性对照与阴性对照? 如果是，请提供相关实验结果。

12. 请确认靶标蛋白在所检测样本中的表达情况，并提供相关参考文献或数据库信息。

The Potential of PSMA as a Vascular Target in TNBC.

13. 是否用过其它同指标产品? 如果是，请提供品牌、货号与实验结果。

无

14. 优化步骤

· 您使用该投诉产品进行过几次WB：两次

· 是否每次都遇到相同问题（例如每次背景条带都在相同位置）：是的

· 您已经优化过哪些步骤：延长封闭时间

厂家邮件回复:

1. 建议尝试更换封闭液，比如用5%BSA进行封闭:

2. 建议做一个不孵一抗、只二抗的阴性对照，检测二抗与样本是否存在非特异性结合

客户重新按照厂家的建议做的结果基本符合实验要求，售后处理结束。