一、胎牛血清成分

　　各项质量指标符合2005版《中华人民共和国药典》第三部附录的要求。

　　1、性状、外观 浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。

　　2、蛋白质含量 3.5%～5.0%( w/v)

　　3、血红蛋白含量 ≤ 0.02%( w/v)

　　4、无菌检验　 阴性

　　5、支原体检验　 阴性

　　6、细菌内毒素 ≤5(EU/ml)

　　7、牛腹泻病毒 阴性

　　8、大肠杆菌噬菌体 阴性

　　9、支持细胞增殖(Sp2/0-Ag14)　生长曲线(接种浓度)最大增殖浓度≥2.5×106 个/ml

　　细胞倍增时间 ≤15h，克隆率 ≥85%

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　　胎牛血清的主要成分有哪些

　　1.蛋白质类

　　包括白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用)、胎球蛋白(促进细胞附着)、转铁蛋白(能结合铁离子，减少其毒性和被细胞利用)、纤维粘连素(促进细胞附着生长)等;

　　2.多肽类

　　主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子，最主要的生长因子是血小板生长因子，还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，虽然在血清中含量很少，但对细胞的生长和分裂也起着重要作用;

　　3.激素类

　　激素对细胞的作用是多方面的。包括：

　　胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关;

　　类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用：

　　促生长激素：促进细胞增殖的效应;

　　氢化可的松：血清中含有微量该成分，它可能具有促细胞贴附和增殖作用。但有人证明，血清中 的氢化可的松，在细胞密度较高时可能有抑制细胞生长和诱导细胞发生分化的作用。

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　　4.其他成分

　　如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。在合成培养基中这些成分的作用并不明显，与蛋白相结合的微量元素对细胞生长起促进作用。

牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。

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胎牛血清功能

1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。

2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。

4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

5.起酸碱度缓冲液作用。

6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

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胎牛血清保存方法

1、需要长期保存的澳洲牛血清，例如澳洲南美胎牛血清，必须储存于-20℃-70℃低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。切勿将血清在37℃放置太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中的有效成分会被破坏，而影响血清质量。如果一次无法用完一瓶，可将40～45ml分装于无菌50ml离心管中。由于血清结冰时体积会增加约10%，因此，血清在冻入低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。

2、一般厂商提供的血清为无菌，无需再过滤除菌。如发现澳洲牛血清有悬浮物，例如澳洲北美胎牛血清中发现有悬浮物，则可将血清加入培养液内一起过滤，切勿直接过滤血清。

3、瓶装胎牛血清(澳洲)南美解冻需采用逐步解冻法：-20℃至-70℃低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温，待全部溶解后再分装，一般以50ml无菌离心管可分装40～45ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沈淀的发生。.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻，这样因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。

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4、热灭活是指56℃，30分钟加热已*解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分灭活.除非必须，一般不建议作此热处理，因为热处理会造成血清沉淀物显著增多，而且还会影响血清的质量.补体参与反应有：细胞毒作用，平滑肌细胞收缩，肥大细胞和血小板释放组，增强吞噬作用，促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。

5、血清中的沉淀物和絮状物：主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成，这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm，5分钟去除，也可不用处理。显微镜下"小黑点"：经过热处理过的血清，沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点"，常误认为血清受污染。一般情况下，此小黑点不会影响细胞生长，但如果怀疑血清质量，则应立即停止使用，更换另一批号的血清。

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