Thermo Fisher Scientific(赛默飞)的热循环仪是一种用于进行聚合酶链式反应(PCR)的实验室设备。以下是使用Thermo Fisher热循环仪的具体方法和注意事项。

　　主要步骤

　　1. 准备PCR反应混合物

　　在无菌环境中将以下试剂按照PCR反应体系的要求混合在PCR管中：

　　模板DNA

　　正向引物和反向引物

　　dNTPs(脱氧核苷三磷酸)

　　PCR缓冲液

　　MgCl2(如果缓冲液中不包含)

　　Taq DNA聚合酶或其他热稳定DNA聚合酶

　　无菌水

　　2. 设置PCR仪参数

　　根据实验要求设置PCR仪的参数，包括：

　　初始变性：95℃，2-5分钟

　　循环参数(通常30-40个循环)：

　　变性：95℃，30秒

　　退火：50-65℃，30秒(根据引物的Tm值调整)

　　延伸：72℃，30秒-1分钟(根据扩增片段的长度调整，每1000 bp需1分钟)

　　最终延伸：72℃，5-10分钟

　　保温：4℃

　　3. 加载PCR反应管

　　将准备好的PCR反应管放入热循环仪的模块中，确保每个反应管都放置牢固，避免接触不良。

　　4. 启动热循环仪

　　选择预设的程序或手动输入上述设置，启动PCR反应。

　　5. 监控和完成反应

　　在PCR反应进行过程中，监控仪器运行情况。反应完成后，热循环仪会自动降温到保温温度(通常为4℃)。

　　6. 分析PCR产物

　　反应完成后，通过琼脂糖凝胶电泳等方法进行PCR产物分析。

　　热循环仪的型号

　　Thermo Fisher提供多种型号的热循环仪，常见的有：

　　Applied Biosystems™ SimpliAmp™ Thermal Cycler

　　Applied Biosystems™ Veriti™ Thermal Cycler

　　Applied Biosystems™ ProFlex™ PCR System

　　使用注意事项

　　无菌操作：确保无菌环境，避免污染。

　　合理设置参数：根据实验需求优化退火温度和循环次数。

　　试剂质量：使用高质量试剂，确保实验结果的可靠性。

　　设备维护：定期校准和维护热循环仪，确保其正常运行。

　　通过以上步骤，你可以有效地使用Thermo Fisher热循环仪进行PCR实验。每个型号的具体操作界面和功能可能略有不同，建议参阅设备的操作手册以获取详细信息和指导。