石蜡包埋组织中蛋白提取试剂盒简介
时间：2021-10-11 阅读：1135
描述：
福尔马林固定石蜡包埋组织在生物医学研究中被广泛使用，但是从石蜡包埋组织中提取蛋白由于甲醛会介导
分子交联而变得异常困难，传统方法从石蜡包埋组织中提取蛋白需要使用有机溶剂重复脱蜡和水化，然后在
高温下或不可避免的超声处理后提取蛋白。这些方法虽然在某些情况下是比较有效的，但是操作繁琐，需要
消耗 3-4 小时。Minute TM 石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒提供了一种简便，快速的方法，不需有机溶剂脱蜡。
整个过程可以在不到 1 小时的时间内完成，蛋白产量可以高达 2-3 毫克/毫升。
应用：
提取的蛋白可用于 SDS-PAGE，WB，ELISA，免疫沉淀和蛋白质组学研究。
试剂盒组分
1. 20ml 缓冲液 A
2. 20ml 缓冲液 B
3. 20 个 1.5ml 离心管
4. 2 根塑料研磨棒
储存：
室温储存
所需附加材料
台式离心机（最大转速 14000-16000rpm）
加热块或者水浴
产品重要信息
本试剂盒可用于从石蜡包埋组织中提取总蛋白，最终提取蛋白产量和蛋白种类由固定时间
和样品时间决定。长时间固定（>48 小时）和固定老化的样品，预计提取的蛋白浓度会较低。
蛋白酶抑制剂推荐在 Buffer B 转移到新的 1.5ml 离心管后添加（见步骤 3）。蛋白浓度测定，推
荐使用表面活性剂兼容的 BCA 试剂盒，因为提取缓冲液（Buffer B）中含有 1%的 SDS。研究
蛋白磷酸化，磷酸酶抑制剂（如罗氏）应在使用前加入 Buffer B 中。
操作方法：
1. 去除组织切片中多余的石蜡，组织切片厚度大约在 10-20um，大小应在 30-60 平方毫米。取
4-5 个组织切片放入 1.5 或 2.0ml 离心管中（实验室自备），加入 1ml Buffer A。
2. 在 90-95℃加热容块或水浴中孵育 8-10 分钟。翻转管子 2-3 次后，迅速将热的缓冲液*去
除，留下组织在管中。用吸头将组织刮到一个新的 1.5ml 离心管中（试剂盒内提供的，注意
不要试用其他离心管，可能与提供的研磨棒不匹配）。
3. 翻转 Buffer B 瓶子 20-30 次，使组织分离粉混匀，快速转移 200ul Buffer B 到装有组织的管
子中（可选：将吸头剪掉 2-3mm 使开口变大更容易转移 Buffer B）。Buffer B 加入的量根据
组织切片的数量决定，一般每个组织切片使用 50ul Buffer B。
4. 使用试剂盒提供的研磨棒扭转研磨组织样品大约 2 分钟（研磨棒是可重复使用的，用蒸馏水
清洗，用纸巾擦干即可）。盖上盖子，90-95℃加热块中或水浴加热 40 分钟-1 小时。加热后
在 14000-16000rpm 离心 10 分钟。将上清液转移到一个新的离心管中即可用于下游应用或存
储于-80℃。