产品及特点

本产品是根据本公司的双染料 RT-LAMP 技术开发的荧光和可见光双模式检 测试剂盒 ，它既可以用于荧光 RT-LAMP 扩增及检测 ，也可以用于可视化 RT-LAMP 扩增及检测 ，适用于各种针对核酸的快速定性检测。  本产品具有下列特点：

1.   含可见光和荧光染料，  既可以用金属浴和水浴扩增用可见光肉眼判断结果 ，也可

用荧光 PCR 仪进行实时荧光检测。

2.   内含的 dUTP-UNG 可防交叉污染。

3.   特异性比 RT-PCR 高，  因为 RT-LAMP 扩增使用 4-6 条引物而不是两条。

4.   灵敏性可达 10 拷贝/反应以下  (随引物而不同)  ，故假阴性率更低。

5.   只可用于科研 ，只可进行定性检测 ，不能用于定量检测。

自备 RNA 模板

总 RNA

或 poly(A) mRNA

或专一的 RNA

注意 ：RNA 样品不能有基因组 DNA 污染。

100-500 ng

10-500 ng

0.01pg-500ng

钟在 FAM 通道采集一次荧光信号。

13. 如果使用 PCR 仪、金属浴或水浴进行扩增，再使用 qPCR 仪进行终点法荧光读数： 则在扩增前和扩增后，分别在 qPCR 仪器上测荧光读数(温度设为 60-65 ℃，  1 次循环，每次循环 1 分钟，在 FAM 通道采集一次荧光信号。注意：  测荧光读数必 须在 65℃进行)  。扩增反应按 60-65 ℃ ，90 分钟进行。

四、   结果分析及解读

14. 如果是用普通 PCR 仪器、水浴或金属浴进行的扩增，反应结束后只能肉眼判断结 果。将反应管放置在白色背景(如白纸) 前观察。扩增阳性对照管内反应液将呈现 蓝色，无模板和无引物的阴性对照将呈浅蓝色。如果扩增阳性对照管内反应液不呈 现蓝色，或无模板和无引物的阴性对照任何一个呈现蓝色，则说明试剂有问题， 实 验无效。请跟厂家联系。

15. 如果实验有效，  则分析 N+2 个样品管的结果。如果样品管反应液的颜色接近扩增 阳性对照管则说明有扩增，如果接近无模板和无引物的阴性对照，  则说明无扩增。 反应结果示例见左图(9 为阴性，  10 为阳性)  。

16. 如果是用荧光 PCR 仪进行扩增， 则可分析扩增曲线和 Ct。试剂盒提供的阳性对照 的 Ct 将小于 60，如果大于 60，说明试剂可能失效，  需跟厂家联系。无模板阴性 对照和无引物阴性对照的 Ct 将大于 90。如果任何小于 90，则说明试剂或环境被 污染，需重复实验或跟厂家联系。如果阳性对照和阴性对照 Ct 都在正常范围，则 分析样品的 Ct。Ct 小于 60 的判断为阳性，大于 90 判为阴性，  在 60-90 之间则 需要重复检测。

17. 如果使用 PCR 仪、金属浴或水浴进行扩增，肉眼检测，再使用荧光定量 PCR 仪 进行终点法荧光读数来判断阴阳性， 则先比较阳性对照和阴性对照。阳性对照样品 扩增后信号增幅应该超过 100%，  阴性对照扩增后信号增幅应该低于 50%，否则 实验无效， 请与厂家联系。如果两个对照均有效，则比较样品扩增前后荧光读数的 差值。如果扩增后荧光信号增幅低于 50%，则判断为阴性。如果荧光信号增幅高 于 100%，则判断为阳性。荧光信号增幅在 50- 100%之间的，  则需要重测。

18. 当实时荧光检测和可视化检测同时用于判读结果时，如果彼此不一致， 以实时荧光 LAMP 的数据为准。一般可视化结果滞后实时荧光检测结果 20-30 分钟，也就是 说，在 qPCR 仪上第 30 分钟时呈现阳性的样品，  其反应液的颜色变化一般在第

50-60 分钟时才能观察到。