组织活性氧(ROS)检测试剂盒（DHE）

一、产品简介：

组织活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针DHE进行组织活性氧检测的试剂盒。本试剂盒中的DHE ROS探针为红色荧光的活性氧探针，具有510/610nm的最大激发/发射波长。DHE ROS探针在组织中活性氧存在的条件下，被氧化生成红色荧光物质，红色荧光强度与组织内活性氧水平成正比，检测 DHE 产物的荧光强度就可以知道组织内活性氧的水平。 在激发波长510nm，发射波长610nm附近，使用荧光分光光度计、荧光酶标仪、等检测DHE产物荧光，从而测定组织内活性氧水平。活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括过氧化氢（H2O2，Hydrogen peroxide）、羟基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、单线态氧（1O2，Singlet oxygen）、 一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO•，Peroxylradical)、过氧羟自由基（HOO•，hydroperoxyl）及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子
（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。
 活性氧（reactive oxygen species，ROS）的产生主要是氧化磷酸化的结果，在呼吸链中，在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应，在酶或非酶作用下引发 一系列反应生成不同种类的活性氧：“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基（O2•-）。超氧阴离子遇水生成 H2O2，同时过氧化氢也可由氧气在单 胺氧化酶（monoamine oxidase，MAO）的作用下生成，生成的过氧化氢在髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）的催化下与 Cl-反应可生成ClO-，在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•，超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。
 适用：新鲜组织， 一般最好使用新鲜组织样本检测活性氧，反映的是组织当时的活性氧状态。冻存的组织样本的ROS在长期冻存过程中会损失掉，有条件的话就使用新鲜样本，不建议使用冻存的组织样本。已经冻存的组织样本中残余的ROS也可以用本试剂盒检测。

二、产品组成：

三、自备材料：

1、荧光分光光度计或荧光酶标仪，离心机，移液器，冰箱，冰盒

2、PBS 缓冲液或者 HBSS

3、离心管，吸头，一次性手套，荧光检测专用黑色 96孔板

 组织活性氧(ROS)检测试剂盒（DHE）

四、操作步骤(仅供参考)：

1、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2、荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

3、探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。

4、尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

5、原位检测必须使用荧光检测专用的黑色透明底96孔细胞培养板。

6、操作步骤仅供参考，请根据实际样本情况调整。

五、注意事项：

1、正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3、禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并*清除残留清洁剂。

6、实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

7、避免反复冻融。

8、可以根据需要分装后冻存。

9、探针为DMSO溶液，在 2-8℃时是固体状态，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

六、有效期：-20 ℃避光有效期为一年

组织活性氧(ROS)检测试剂盒（DHE）