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CCK8 检测耐药细胞株耐药株 PC9R 吉非替尼药物的耐药作用

时间：2022-10-27 阅读：396

CCK8 检测耐药细胞株耐药株 PC9R 吉非替尼药物的耐药作用

细胞：PC9R、PC9

药物：吉非替尼

仪器与试剂：CCK8 试剂日本同仁；

分光光度计 TECAN

实验过程：

一：细胞培养

PC9R 和 PC9 均采用含 10％胎牛血清，1%双抗（青链霉素混合液）的 DMEM 培养基，置于 37℃，5% CO2 的培养箱中进行培养。显微镜下观察细胞状态。

二、吉非替尼药物贮藏液的配置

向已称好样本重量的 EP 管中直接加入 DMSO 稀释成 50mmol/L 的浓度，使用再稀释弄所需的使用浓度。

三、CCK8 试验

1. 在 96 孔板中配制 100 ul 的细胞悬液（2000–3000 cells/孔）。将培养板在培养箱预培养 24 小时 ( 在 37℃， 5% CO2 的条件下 )。

2. 向培养板加入 10 ul 八个浓度（0.390625uM, 0.78125uM, 1.565uM, 3.125 uM ,6.25 uM, 12.5 uM, 25uM, 50 uM）的待测药物。

3. 将培养板在培养箱孵育 24 小时。

4. 向每孔加入 10 ul CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D 值的读数，斜着培养板壁加，不要插到培养基液面下加) 。加入后轻轻振摇培养板。

5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。

6. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

四、 IC50 结果计算

1、仪器导出原始数据

吸光度检测	通道	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
检测波长	A
450 nm	B		1.001	0.881	0.915	0.686	1.951	1.422	1.315	1.314	1.209	2.044
	C		1.226	1.254	1.166	0.581	2.273	1.503	1.478	1.508	1.112	1.973
检测日期	D		1.57	1.544	1.543	0.522	1.929	1.661	1.803	1.743	1.143	2.145
2019/8/1	E		1.691	1.787	1.717	0.487	0.239	1.943	1.858	1.796	0.93	0.232
	F		1.811	1.769	1.838	0.399	0.234	1.941	1.859	1.896	0.857	0.244
检测时间	G		2.094	1.838	1.905	0.525	0.25	2.077	1.903	1.963	0.851	0.232
16:07:31	H

加样备注：

PCR

PC9R

12.5uM

25uM

0uM

12.5uM

25uM

0uM

6.25uM

25uM

0uM

6.25uM

25uM

0uM

3.125uM

25uM

0uM

3.125uM

25uM

0uM

1.5625uM

50uM

空白

1.5625uM

50uM

空白

0.78125uM

50uM

空白

0.78125uM

50uM

空白

0.390625uM

50uM

空白

0.390625uM

50uM

空白

2、计算结果

亲本株	浓度(uM)	50	25	12.5	6.25	3.125	1.5625	0.78125	0.390625
	抑制百分比 (%)	87.32965	80.36832	61.80479	46.16943	27.55064	17.64273	13.53591	5.819521
耐药株	浓度(uM)	50	25	12.5	6.25	3.125	1.5625	0.78125	0.390625
	抑制百分比 (%)	64.61313	49.46828	38.70554	30.67473	17.51008	10.35937	8.544188	4.015402