GFP蛋白含量检测试剂盒【种属:大鼠】操作原理分享
时间:2020-07-04 阅读:675
GFP蛋白含量检测试剂盒【种属:大鼠】操作原理分享:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠绿色荧光蛋白(GFP)水平。用纯化的大鼠绿色荧光蛋白(GFP)捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被的微孔中依次加入大鼠绿色荧光蛋白(GFP),再与HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠绿色荧光蛋白(GFP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠绿色荧光蛋白(GFP)含量。
操作步骤
- 标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。
- 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
- 加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。
- 温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
- 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
- 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
- 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
- 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
- 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
产品图片:
试剂盒组成:
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 |
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封板膜 | 2片 | 2片 |
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密封袋 | 1个 | 1个 |
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酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品 | 0.3ml×6管 | 0.3ml×6管 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 5 ml×1瓶 | 10 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
20×浓缩洗涤液 | 15ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
注:标准品浓度依次为:80、40、20、10、5、0 ng/mL.
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