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GFP蛋白含量检测试剂盒【种属:大鼠】操作原理分享

时间:2020-07-04      阅读:675

GFP蛋白含量检测试剂盒​【种属:大鼠】操作原理分享:

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本大鼠绿色荧光蛋白(GFP)水平。用纯化的大鼠绿色荧光蛋白(GFP)捕获抗体包被微孔板,制成固相体,往包被的微孔中依次加入大鼠绿色荧光蛋白(GFP),再与HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠绿色荧光蛋白(GFP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品大鼠绿色荧光蛋白(GFP)含量

操作步骤

  • 标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  • 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀
  • 加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外
  • 温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟
  • 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
  • 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  • 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 
  • 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)
  • 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

​产品图片:

试剂盒组成:

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份

 

封板膜

2片

2片

 

密封袋

1个

1个

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品

0.3ml×6管

0.3ml×6管

2-8℃保存

酶标试剂

5 ml×1瓶

10 ml×1瓶

2-8℃保存

样品稀释液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

终止液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

20×浓缩洗涤液

15ml×1瓶

25ml×1瓶

2-8℃保存

注:标准品浓度依次为:80、40、20、10、5、0 ng/mL.

上海仁捷生物科技有限公司,是一家专注于免疫检测类试剂的高科技生物公司,主营ELISA试剂盒、蛋白、抗体及其配套试剂。

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