猪血管生成素1（ANG-1）ELISA试剂盒操作步骤

1、编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)。

2、加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4、配液：将20倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用。

5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7、显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟。

8、终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

9、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。