兔p物质(SP) ELISA试剂盒问题解析
正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检祥品应作一式二份,以保证实验结果的雉确性。有时本底较高,说明有非特异性反应
采用羊血清、兔血清或BSA等封闭
1)固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等◇其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。当前常用的是40孔
聚苯乙烯凹孔板●不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等里抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能
2)包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时-般要求門在9σ~96之间∝吸附温度,时间及其蛋白里也
有一定影向,一般多采用
即用不同
司的蛋白质浓度(01、10和10gm等)进行包被后,在其它试验条件
相同时,观察阳性标本的D值。选择OD值*而蛋白里少的衣度。对于多数蛋白质来说通常为1~10gm
3)繭标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELsA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取方阵法"(包被物、待检样品的
参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度·
)酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地旵色反应,而本身无色。有些供氢体(如○PD等)有潜在的致癌作用,应注意防
护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氨体,如TM和ABTs是当前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强醱或强碱以终止反应。通常底物作
用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H202在临用前加入