标签选择：

亲和标签：蛋白重组表达过程中采用亲和标签融合表达有两方面的作用：一方面是为了使蛋白纯化过程变得更加容易；另一方面是为了促进某些不溶性蛋白可溶。蛋白标签可分两类：一类是短肽类标签；一类是长肽以融合蛋白（fused partner）形式共表达。使用不同的蛋白标签需要根据具体案例来分析。

不同的系统步骤稍微有些不同的，大致步骤如下：

真核表达系统的重组蛋白表达步骤：

a.      选择表达载体和宿主细胞（常用的CHO和HEK293）

b.      表达载体的构建

c.      无内毒素的质粒抽提

d.      细胞瞬时转染

e.      表达小试，条件优化

f.       表达分析和鉴定（SDS-PGAE和WB）

g.      大量表达

h.      亲和纯化

i.        检测和鉴定

仅供科研实验产品属性：

英文名称：Recombinant Sphingosine Kinase 1 (SPHK1)

酶与激酶

物种：Homo sapiens (Human，人)

来源：原核表达

宿主E.coli

内毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法测定)

亚细胞定位：：细胞核, 细胞质

预测分子量：29.2kDa

实际分子量：32kDa(差异分析请参阅说明书)

片段与标签：Leu148~Leu398 with N-terminal His Tag

缓冲液成份：20mM Tris, 150mM NaCl缓冲液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）

性状：冻干粉

纯度：> 90%

等电点：6.9

应用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

规格10μg 50μg 200μg 1mg 5mg

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Collagen III (Anti--Collagen Type III 0.5mgCollagen III (Anti--Collagen Type III ) Ⅲ型胶原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型胶原)

ACO2 Protein Human 重组人 ACO2 / Aconitase 2 蛋白 (His & GST 标签)

BTLA重组大鼠 BTLA 蛋白 (ECD, Fc 标签) Protein

CD226 Protein Mouse 重组小鼠 CD226 / DNAM-1 蛋白 (His 标签

原核表达系统的重组蛋白表达步骤：

a.      选择表达载体

b.      密码子优化

c.      基因合成/亚克隆

d.      转化表达菌株

e.      蛋白表达小试分析

f.       如果蛋白可溶，蛋白亲和纯化

g.      如果蛋白不可溶，则需要变复性来制备可溶蛋白。

h.      鉴定，包括SDS-PAGE和WB鉴定

GZMH蛋白；表达蛋白的分析、纯化、检测

　　诱导表达成功后，表达蛋白的分析、纯化、检测应该顺当，按一般的实验步骤做没太大的问题。

操作步骤 ：

根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。

1、样品前处理：

a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。

c)对于组织样品： 切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2、后处理：

将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

同禽病毒性关节炎病毒禽呼肠孤病毒PCR检测试剂盒 英文名称; Avian Reovirus（ARV，)RTPCR 50T

豚鼠疱疹病毒PCR检测试剂盒 英文名称; Guinea Pig Herpes VirusPCR 50T

问号钩端PCR检测试剂盒 英文名称; Leptospira interrogansPCR 50T

虾肝肠微胞虫PCR检测试剂盒 英文名称; Enterocytozoon hepatopenaei（EHP）PCR

人神经营养素-3Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Cyclin D1 周期素D1抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh NFX1 核转录因子X盒结合蛋白1抗体 规格 0.2ml

Human decay-accelerating factor,DAF ELISA Kit 人降解加速因子 96T

TNF-alpha(1F6) 英文名称： 坏死因子-α单克隆抗体 0.1ml

CTNNA3 英文名称： 钙粘蛋白相关蛋白CTNNA3抗体 0.1ml

Anti-Cyclin D1 周期素D1抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

鞘氨醇激酶1(SPHK1)重组蛋白牛腺病毒型PCR检测试剂盒 英文名称; Bovine Adenovirus(BAV1) 3  PCR

牛腺病毒通用PCR检测试剂盒 英文名称; Bovine Adenovirus(BAV1)  PCR

牛细小病毒PCR检测试剂盒 英文名称; Bovine Parvovirus (BPV)PCR

牛肾盂肾炎棒杆菌PCR检测试剂盒 英文名称; Corynebacterium renalePCR

注意事项：  

1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。

2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。

3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。

4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作