近日有客户进口elisa试剂盒间接法中，如何提高阳性值，在抗原浓度不变的情况下？他用自己的抗原包被的板子，用自己的酶标二抗和显色液做，阳性值很低，为OD 0.5。但是试剂盒中的酶标二抗和显色液做，阳性值却很高OD 1.4，这样看来我的抗原应该没问题，好像问题出在酶标二抗上，请劲马技术帮忙分析。根据客户留言在网上问题解答如下：

    先要确定两种酶标二抗使用的是不是同一批包被的板，因为虽然是相同的抗原，可能两次包被不一样。

    如果是同一批板，出现这种情况只能说明你的酶标二抗失活了，买新的二抗，按说明书上的稀释倍数稀释；阴性对照有颜色很可能是没封闭好。阳性值是由你的抗原抗体间亲和力决定的，增加抗原抗体用量，或提高二抗浓度，但灵敏度可能会降低，你可以重新摸下工作浓度；

    阴性值降低，你可以采用BSA封闭2小时看看，好像没听说有人用FCS封闭的，你可以尝试采用其他的封闭液，据我了解，用BSA封闭不是很好，可以试试脱脂奶粉；再就是TMB本身时间长了就会略显色，你可以调整显色时间。