说到ELISA Kit，信任大家都不会陌生。ELISA Kit的诞生，是为了帮助科研作业者省掉繁琐的试验过程，进步科研功率。假如选对了试剂盒，用对了试验技巧，就会让您的试验功率事半功倍。

一.如何选购ELISA Kit 
市面上任意品牌的一个ELISA Kit售价都在1000元以上假如选错了试剂盒轻则丢失一笔科研经费重则毁掉整个试验课题所以选个对的，很有必要！市面上的ELISA Kit质量良莠不齐，想要挑选到适宜的试剂盒还真不是一件很容易的事情。真真假假，难以区分。
1 查找待测样本的蛋白浓度：能够通过NCBI的文献，uniprot，pax-dab上给出的蛋白表达量参阅值来比较ELISA试剂盒中给出的样本值与报道值是否一致；
2 试剂盒的应用种属、检测样本的品种：除试剂盒特别阐明外，一般不同种属不能通用。常见待测样本品种有：血清和血浆（不同抗凝剂），细胞上清，和细胞裂解液，试剂盒中不同样本的稀释液不混用；
3 试剂盒的检测规模：也就是标曲规别要注意待测样本浓度是否落在标曲规模内，关于浓度很高的样本，能够先进行预试验摸索到比较好的稀释倍数后再很多测定样本。 
4 试剂盒中的稀释线性及回收率：
a.稀释线性一般指样本稀释线性，是将样本梯度稀释下来，看各稀释梯度浓度是否成线性；参阅样本稀释线性能够挑选样本的稀释倍数；
b.稀释线性也有做加标稀释线性的情况，加标稀释线性是将规范品参加样本中测定参加的规范品浓度测定是否准确；同样也是断定待测样本稀释倍数的参阅指标。一般线性和回收率的规模在80%-120%比较适宜； 
5 试剂盒的其它指标：
a.灵敏度：试剂盒能够检测到的样本低浓度的才干，假如待检指标含量很低，需求挑选高灵敏度的ELISA试剂盒；
b.板间和板内的变异系数（CV%）:反映板内和不同板之间是否均匀，CV%一般小于10% 比较好。
6 试剂盒的有效期：试剂盒的有效期一般是半年至一年，样本准备时刻需求考虑到试剂盒的有效期。

二.ELISA Kit 运用技巧
选对ELISA Kit只是步要想获得理想的试验成果还需掌握运用技巧所以用对了，才干事半功倍！Bio-Swamp试剂盒团队，历经多年的实践，总结了ELISA Kit运用技巧，与您分享。
1 样本的准备：尽量运用新鲜样本，不运用有溶血，被细菌污染、标本保存时刻过长和标本凝结不全的样本。ELISA检测宜采集新鲜标本，如不能立即测定，5天之内应4℃保存，关于1周后检测的样本应低温冻存；做好分装，长时刻冻存的样本防止反复冻融。
2 仔细阅读阐明书，了解整个流程，推荐画出扼要步骤图；提早准备试剂，比如常见20X洗涤液是浓缩液，需求用超纯水提早稀释准备好。一般的检测抗体和酶标二抗需求用对应的稀释液稀释至作业浓度。
3 不同批次的试剂不要混用，查看各组分的有效期。
4 预包被的酶标板条和各试剂组份需求室温平衡30 min以上，这样做的意图能使反响微孔内的温度较快地到达所需温度，预防后续试验中由于孵育温度或是时刻不行充沛，而将一些弱阳性样本不能检出。
5 待测样本加样：待检样本过多时，建议分批操作；需求稀释的样本提早做好稀释，注意选对适宜稀释液；控制好加样时刻，防止加样费时过长造成误差；注意加样视点，垂直参加孔底，不要接触孔壁, 做到一份样本一个移液头，防止交叉污染。 
6 温育和洗板：温育时刻和温度一般根据试剂盒的阐明书进行挑选。温育时能够选用水浴或许湿盒孵育,防止“边缘效应”。①手工洗板时，拍板时要垂直，防止交叉污染，用力不能过猛，防止抗原抗体复合物脱离；②洗板机洗板时应经常查看冲洗头是否通畅。
7 显色：市售ELISA 试剂盒中，一般是以四甲基联苯胺(TMB)为底物的显色液，反响条件为37℃或室温反响15～30 min。显色反响需求避光。
8 读数和数据剖析：停止后读取成果尽量在15min内完成，读取OD值时酶标仪需先预热15～30 min再进行。数据剖析一般用四参数和直线拟合法，挑选哪种拟合方式，能够根据标曲的相关系数（R2）来断定，R2一般需求大于0.99。