酶联免疫吸附的原理与方法
1. 1  原理
酶联免疫吸附测定的基本原理是把抗原或抗体在不损坏其免疫活性的条件下预先结合到某种固相载体表面; 测定时, 将受检样品( 含待测抗体或抗原) 和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原或抗体复合物; 反应终止时, 固相载体上酶标抗原或抗体被结合量( 免疫复合物) 即与标本中待检抗体或抗原的量成一定比例; 经洗涤去除反应液中其他物质, 加入酶反应底物后, 底物即被固相载体上的酶催化变为有色产物, zui后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量[ 2] 。
1. 2  方法
ELISA 试剂盒常用的测定方法主要有直接法和间接法两种: 直接法是酶标记抗体与待检测样本中固相抗原直接作用, 加入底物后, 显色( 其颜色深浅与样本中抗原量成正比) ; 间接法是使已知抗原吸附在固相载体上, 与待检测样本中的抗体作用, 再加入酶标记抗同种动物抗体的免疫球蛋白( 抗抗体) , 使与特异抗原抗体复合物中的抗体作用, 加入酶底物, 显色( 颜色深浅与样本中抗体量成正比) [ 1] 。ELISA 有许多改良方法, 如双抗体法( sandwichELISA) 、双抗体夹心法( double_antibody sandwichtechnique) 、竞争法、酶- 抗酶法和均质法( homogeneousELISA) 、生物素- 亲和素放大系统( biotina-vidin system, BAS) ELISA 及斑点_ELISA ( dot_ELISA)等, 大致可分为三类: ( a) 测定抗体的间接法; ( b)测定抗原的双抗体夹心法: ( c) 测定抗原的竞争法[ 3] 。前两种方法主要用于测定抗体和大分子抗原, 适用于临床诊断上, 而竞争法是测定小分子抗原的方法, 因而尤其适用于食品分析。竞争酶联免疫吸附分析法又可分为直接竞争法和间接竞争法。直接竞争法主要有三步: 抗体吸附于固相载体, 温育后清洗?? 加入含有抗原的待测液及酶标记的抗原, 温育后清洗?? 加入酶底物温育后显色, 判断结果。间接竞争法主要有四步: 抗原吸附于固体载体, 温育后清洗??加入含有抗原的待测液和抗体, 温育后清洗?? 加入酶标记抗体, 温育后清洗?? 加入酶底物温育后显色, 判断结果[ 4] 。