真菌毒素ELISA试剂盒操作处理方法
时间:2020-01-08 阅读:266
收获粮食和库存粮食的真菌毒素的检测,往往批量大,时间紧,实验室一般用酶联免疫(ELISA)试剂盒进行筛选,由于市供ELISA试剂盒品牌比较多,前处理方法和操作方法也不尽相同,不同的试剂盒存在着测定结果方面的偏差。
真菌毒素ELISA试剂盒进行测试,研究分析试剂盒测试结果的稳定性、精密度和准确度,来选择试剂盒的应用;研究建立了新的ELISA检测方法的样品前处理*参数,验证了ELISA方法用于谷物中AFB1分析的可行性,并用HPLC重点验证了测试盒的灵敏度、线性关系、检测重复性、加标回收率等指标;
结果表明,对ELISA测定结果影响zui显著的是甲醇浓度,其次是提取溶液体积、提取时间以及提取温度。建立了新的ELISA法测定玉米中AFB1的前处理条件参数为:60目细度,7倍的75%甲醇溶液升温到30℃时,振荡45min提取。用高效液相法重点验证了酶免测试盒时,HPLC法测定AFB1标准曲线为在200μg/mL到0.2μg/mL浓度的稀释过程*不产生偏差,线性相关系数为1.0000。在添加浓度为0.1~20ug/kg时,HPLC法加标回收率为68%-88%,ELISA法的加标回收率为60%-108%,用ELISA法测定时线性系数为0.9978,灵敏度为0.0497 ug/L, ELISA法测定玉米中AFB1与HPLC法测定时的回收率相当。
黄曲霉毒素主要是由黄曲霉菌和寄生曲霉菌等多种真菌产生的有毒代谢产物,广泛存在于粮食谷物和加工食品中,在众多霉菌毒素中,黄曲霉毒素B1(AFB1)毒性大,致癌力强,理化性质稳定,对人类健康的危害性极大。