1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immuno sorbent assay , ELISA) 。ELISA将抗原或抗体结合在固相载体表面，利用抗原抗体的特异性结合以及抗体或者抗原上标记的酶催化特定底物发生显色反应，实现目标物检测的免疫分析方法，可测至皮摩尔（pmol）级别。ELISA已成为分析化学领域中的前沿课题 ，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术( immunoenzymatic techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术 。

一、基本原理

它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。

在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体(免疫吸附剂) ②酶标记的抗原或抗体(标记物)③酶作用的底物(显色剂)。

测量时，抗原(抗体)先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物)，此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。

其所生成的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定。其方法简单，方便迅速，特异性强。

二、分类

该法由种类和变化可分为以下几种:

(一)双抗体夹心法

(二)间接法

(三)竞争法

(四)双位点一步法

(五)捕获法测IgM抗体

(六)应用亲和素和生物素的ELISA

三、特点

该法相较其他方法而言，有以下特点：

1. 灵敏性高

该测定法的灵敏度来自作为报告基团的酶。酶是一种有机催化剂，很少量的酶即可诱导大量的催化反应 ，产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。ELISA实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。

2. 特异性强

其特异性来自抗体或抗原的选择性。抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原抗体反应具有高度的特异性。

注意事项：

1）正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

2）实验材料的保存比较重要，一般需要注意的点如下：

※ ELISA试剂盒一般是4℃保存，如果有溶解后的标准品次日需要使用，则需要-20℃，防止降解导致结果不准；

※ 未使用的标准品与未用完的试剂盒一起保存，一般试剂盒拆分后建议一周内使用，由于湿度等影响，长期放置易引起产品的不稳定；

※ 对于洗涤，常规建议机洗，有些较为老款的洗板机由于时间较久，可能加液冲力较大或有固定的洗涤液，可能会导致结果异常，需慎重选择；

※ ELISA试剂盒正式实验前，建议先进行预实验，避免出现浓度超出检测限导致的结果无法使用的情况；

※ 各家试剂盒可能略有差异，使用前建议详细阅读说明书。