蛋白酶k配制、使用方法及作用

      蛋白酶k（Proteinase K）是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，用于生物样品中蛋白质的一般降解。可以用于消化各种蛋白。用于各种常见的分子生物学、细胞生物学等相关实验，例如基因组DNA抽提、酶的消化去除等。
     酶活力，>30U/mg。在37℃，以血红蛋白为底物，1分钟内可以产生相当于1微摩尔酪氨酸Folin阳性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量，定义为一个单位蛋白酶K酶活力。
在很宽的pH范围内有效，有效的pH范围为pH4.0-12.5，较好在pH范围为pH7.5-8.0。
蛋白酶K的较好反应温度为65℃，但在65℃或更高的温度蛋白酶K自身的也非常迅速地降解。很多时候反应温度选择50-55℃。
    在0.2-1%SDS或约10mM尿素存在的情况下，蛋白酶K显示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作浓度为0.05-1mg/ml，根据所用缓冲液是否含有SDS、尿素、pH是否适合、温度是否适合等因素确定具体的工作浓度。
    蛋白酶K跟蛋白酶有什么区别：
蛋白酶K广泛应用于分子生物学,药理学等科研方面.一种非特异性、枯草杆菌蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶,具有很高的比活性.一般储存在-20°C,避光防潮密闭干燥。
蛋白酶是所有能够催化分解蛋白质的酶类的统称,而蛋白酶K则是特指一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,用于生物样品中蛋白质的降解,比如在提取DNA时溶解DNA的水中就有一定量的蛋白酶K.所以它们不属于同一个产品。
     蛋白酶K配制标准：20mg/ml蛋白酶K配制标准(proteinase K)：将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直蛋白酶K*溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
   蛋白酶K的保存：保存在-20℃冰箱里，避免反复冻融，有效保证12月。
孵育温度为5565℃，理想孵育温度为58℃，孵育时间为15分钟48小时;理想孵育时间为2小时。
作用：蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理，它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用，以增加探针与靶核酸结合的机会，提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时，都会对细胞的结构有一定的破坏，导致组织切片的脱落，细胞核?的消失，从而影响杂交结果。EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用，解决上述出现的问题，并能达到理想的染色效果。
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