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能将微量的DNA大幅增加,是分子生物学研究和实验的常规方法,PCR实验室广泛应用于生物医学各个领域,例如:艾滋病检测,乙型肝炎,禽疫病,癌基因的检测和诊断,DNA指纹,个体识别,亲子鉴定及法医物证等等。信阳实验室净化装修
标准的PCR 实验室分为四个区域,分别为:
n1.试剂配制区;
n2.样品处理区;
n3.核酸扩增区;
n4.产物分析区;
如使用全自动分析仪,区域可适当合并。三四区可合并为扩增产物分析。
一、PCR实验室布局
PCR实验室原则上为试剂准备区,样品制备区,扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域,并设有走廊,各工作区域应设缓冲间,工作区与缓冲间宜安装连锁装置。不同功能的工作区应是分隔独立的,各工作区有明显的标志,不能直通,如果紧密连接,需安装物品传递窗。前两区为扩增前区,后两区为扩增后区,即从:试剂准备区——样品制备区——PCR扩增室——产物分析室,不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。各工作区顶部应该安装紫外灯,紫外灯波长为254mm,每20㎡一支40W的紫外灯。
PCR实验室设计规划平面布局
【各区的功能分别为】
试剂准备区:扩增试剂的配制、分装和保存。
样品处理区:样品登记、分装;核酸提取、保存和加样。
扩增产物分析区:扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
扩增前区与扩增后区应严格分开,须使用不同的房间,两区之间建议有一定的间隔。
二、PCR实验室主要设备
试剂准备区
仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等,加样器、天平除了要外,还应有定期校准。 试剂分装应在超净台中进行 扩增反应混合液应使用分子生物学级的,试剂制备好后应有质检:一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。
标本制备区
仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器
扩增区
扩增区的主要仪器是核酸扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯。扩增仪需进行校准。并配备UPS电源,以防止由于电压的波动,停电对扩增效果的影响。
分析区
本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等 洁净实验区的缓冲间部分面积不能超过主实验室的八分之一,这是有规定的。
三、PCR实验室建设规划要点
1、主体结构:
主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。
2、标准的三区分隔和气压调节:
将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立实验区设置有缓冲区, 同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。
可打开缓冲区Ⅰ,缓冲区Ⅱ和 PCR 扩增区的排风扇往外排气,在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气。
3、 消毒:
在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用。
在试剂准备区和标本制备区 还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。
4、机械连锁不锈钢传递窗:
试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁方式)传递窗传递,保证试剂和标本在传递过程中不受污染(人物分流)
5、 地面:
地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好。便于进行清扫,耐腐蚀。
6、照明:
灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。
在建设过程注意事项
●规范的安装流程和全面的服务流程。
●严格按照规范科学设计的安装流程。
●安装前需要确定以下安装条件,如:电源电压,电源进线位置,电话网络线进线位置,进水水压,小安装空间,地面平整度,通风孔、进水管和下水管的位置等,理想状态的空间尺寸和通风口尺寸。
四、污染的预防与控制
PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中,常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因組DA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染,实验就必须停止,直到找到污染源为止,而且实验结果必须作废,需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐,浪費人力物力。因此要避免污染,首先应是预防,而不是排除。信阳实验室净化装修
4.1工作区域的严格划分
(1)各个实验区域设置合理
(2)各个实验区域要有明显的标记(如醒目的门牌或不同的地面鳜色等),以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。
4.2合理的系统设置
(1)合理的空调通风系统设置,尽量釆用全送全排的空调系统;
2)严格的气流压力控制,保证不同的实验区内不同的压力要求。
4.3规范的操作
(1)临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训,经培训冾格后才能从事临床基因扩增检验的工作
2)在实验操作过程中,操作者必须戴手套,并经常更换。此外,操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施;
(3)清洁工作及时、正确。实验工作结朿后,必须立即对本区进行清洁。除常规的消毒液体对表面进行摽拭消毒或紫外线灯的照射消毒外,对一些实验设备还应进行高压消毒处理。
4.4严格的管理
(1)严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室,有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门
(2)在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服(如不同颜色),当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域;
(3)尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。
4)扩增产物分析区是主要的扩增产物污染来源,废液不能在实验室中倾倒,必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉,用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理,如焚烧等
5)扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,应特别注意实验人员的安全防护。
4.5完备的实验室配套设施
完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件,应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器,如超净工作台、离心机、加样器等。