使用制备液相色谱有哪些技巧
时间:2023-03-07 阅读:729
制备色谱是以分离出纯物质为目的的色谱系统,分析色谱是以分析出样品组分信息为目的的色谱系统,基于他们目的的不同,制备色谱相对于分析色谱有很多不同特征,不能简单等同。
使用制备液相色谱时有哪些技巧。
一、快速液相色谱纯化
使用快速色谱法进行纯化的缺点是该方法固有的分辨率较低。快速液相色谱柱使用更大的粒径和柱容量,允许使用更多的起始材料,但以分辨率和纯度为代价。如果化合物不需要更高的纯度,或者如果下一步将进行 HPLC,这可能是您的选择。
1、确定溶剂系统
样品的纯度(即混合物中有多少化合物)可以使用薄层色谱法 (TLC) 和组分的相对极性进行定性测定。使用 TLC 预先筛选最佳流动相和固定相将节省时间和金钱。根据所使用的溶剂,您可能需要在通风柜中运行色谱柱,因为存在潜在的危险烟雾。
2、确定要使用的列
选择分离柱时要考虑样品量。色谱柱装载量因粒径和体积而异。一般来说,快速液相色谱柱的最大装载量约为硅胶重量的 10%。较大的色谱柱能够处理千克数量的色谱柱,但如果您没有那么多起始材料,那么您只会在硅胶和额外的溶剂上浪费金钱来运行这些大型色谱柱。在确定液相分析柱、基质和溶剂后,您就可以进行快速分离了。
3、液相色谱柱
无论您是自己装柱还是购买一根预装柱,按重量计算硅胶与化合物的比例(即硅胶:化合物)都将帮助您实现更有效的分离。
二、HPLC纯化
在 HPLC 上运行样品相当简单,因为在快速液相色谱柱上预纯化过程中确定的许多参数都可以应用于此过程。如果您在没有预纯化步骤的情况下运行 HPLC 分离,请考虑使用上面列出的指南来开发合适的 HPLC 方法。使用 HPLC 时的另一个考虑因素是计算的背压。由于 HPLC 色谱柱的粒径更小,可实现更高质量的分离,因此这些系统往往在高压条件下运行,而闪蒸分离的压力相对较低。使用有关粒径和形状、色谱柱内径和溶剂规格的信息计算估计的背压。