制备液相色谱的操作规程
时间:2023-05-08 阅读:794
液相色谱(Liquid chromatography,LC)是一种常用的分离和分析技术,在药物分析、生化分析、环境检测等领域有广泛应用。制备液相色谱操作规程如下:
一、实验器材准备
液相色谱仪:选择型号适合的液相色谱仪,并按照厂家提供的说明书正确安装和调试。
色谱柱:根据分析目标和样品性质选择合适的色谱柱,如C18、C8、Phenyl等。
称量仪:选择精度高的电子天平或半自动秤,用于称取溶液中各组分的质量。
4.pH计:用于调节试剂的酸碱度,校准pH计。
试剂:包括纯水、有机溶剂、缓冲液等。
二、实验步骤
样品处理:对于复杂样品需经过前处理,如离心、过滤、萃取等步骤。
准备溶液:精确地称取所需的试剂,配制成浓度适当的溶液。注意不同试剂之间的相容性。
稳定样品注射器:将样品注射器放置在洗涤瓶中,用流动相(如纯水)反复冲洗多次,直到样品注射器内无气泡为止。
运行实验:在处理好的样品中加入色谱柱适合的溶剂,然后将样品通过稳定的样品注射器注入液相色谱仪中。选择合适的工作模式(如等速排出、渐变洗脱等),开始运行实验。
记录实验数据:根据设备规格和实验要求,在设定的时间内收集数据。注意记录实验过程中发生的任何异常情况。
数据分析:对实验所得数据进行处理和分析,以获得所需结果。
三、操作注意事项
实验室安全:进行操作前应熟悉实验室安全规定,佩戴防护手套、眼镜、面具等个人防护装备,确保实验操作的安全性。
避免污染:所有实验室仪器、试剂、耗材等都应保持干净清洁,避免污染导致实验误差。
标准曲线:根据实验要求制备标准曲线,并在实验过程中同时进行样品和标准曲线的测量,以保证实验结果的准确性和可靠性。
操作规范:按照操作规程操作液相色谱仪,严格控制实验参数,如流速、温度、洗脱时间等,确保实验结果的稳定性和可重复性。
仔细记录:对于实验过程中发生的异常情况需及时记录并排除,同时将实验过程中的每个步骤详细记录下来,以便后期分析和查看。