1.准备好加了新鲜培养基的多孔板，并在实验前于37°C下预平衡。

2.使用传代次数少并具有融合度或密度（对数生长）的细胞。

3.限制胰蛋白酶暴露时间，仔细监测细胞分离情况。

4.根据优化方案进行细胞计数并使用适量细胞数；所用细胞过少可能导致细胞死亡率增加。

5.采用高质量DNA，使用内毒素去除试剂盒进行纯化；请通过测定A260:A280比值检查各质粒制备液的纯度。

6.室温下以离心速度80-100×g和方案规定的时间进行离心。

7.离心后加入Nucleofector™溶液，混匀溶液/细胞沉淀制备成单细胞悬液，避免对细胞沉淀进行额外操作或用移液器枪头抽吸。

8.Nucleofection™核转后，用核转试剂盒内配的一次性移液管在电转耗材中的细胞顶部加入约500μL预热培养基。