5个步骤8个TIPS助你提高转染效率!
时间:2023-09-06 阅读:184
转染5步骤:
第一步:获取目标细胞
第二步:混合和结合
转移至Lonza认证的电转杯或电转板条中
第三步:选择Nucleofector程序,放入电转耗材,按下开始按钮
第四步:用培养基将电转耗材的细胞转移出来
第五步:转移至培养M中。Nucleofectionmm电转后3-8小时即可检验
提高核转效率8个TIPS:
1.准备好加了新鲜培养基的多孔板,并在实验前于37°C下预平衡
2.使用传代次数少并具有推荐融合度或密度(对数生长)的细胞
3.限制胰蛋白酶暴露时间,仔细监测细胞分离情况
4.根据优化方案进行细胞计数并使用适量细胞数;所用细胞过少可能导致细胞死亡率增加
5.采用高质量DNA,使用内毒素去除试剂盒进行纯化;请通过测定A260:A280比值检查各质粒制备液的纯度
6.室温下以离心速度80-100×g和方案规定的时间进行离心
7.离心后加入Nucleofector™溶液,混匀溶液/细胞沉淀制备成单细胞悬液,避免对细胞沉淀进行额外操作或用移液器枪头抽吸
8.Nucleofection™核转后,用核转试剂盒内配的一次性移液管在电转耗材中的细胞顶部加入约500μL预热培养基