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5个步骤8个TIPS助你提高转染效率!

时间:2023-09-06      阅读:184

转染5步骤:

第一步:获取目标细胞



第二步:混合和结合



转移至Lonza认证的电转杯或电转板条中



第三步:选择Nucleofector程序,放入电转耗材,按下开始按钮



第四步:用培养基将电转耗材的细胞转移出来



第五步:转移至培养M中。Nucleofectionmm电转后3-8小时即可检验



提高核转效率8个TIPS:

1.准备好加了新鲜培养基的多孔板,并在实验前于37°C下预平衡

2.使用传代次数少并具有推荐融合度或密度(对数生长)的细胞

3.限制胰蛋白酶暴露时间,仔细监测细胞分离情况

4.根据优化方案进行细胞计数并使用适量细胞数;所用细胞过少可能导致细胞死亡率增加

5.采用高质量DNA,使用内毒素去除试剂盒进行纯化;请通过测定A260:A280比值检查各质粒制备液的纯度

6.室温下以离心速度80-100×g和方案规定的时间进行离心

7.离心后加入Nucleofector™溶液,混匀溶液/细胞沉淀制备成单细胞悬液,避免对细胞沉淀进行额外操作或用移液器枪头抽吸

8.Nucleofection™核转后,用核转试剂盒内配的一次性移液管在电转耗材中的细胞顶部加入约500μL预热培养基



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