一文教你如何选择报告基因！
时间：2024-01-03 阅读：112
一，什么是报告基因？
报告基因( reporter gene) 是一种编码在内源蛋白背景下易被检测出来的蛋白质或酶的基因。报告基因与目的基因或调控序列相连，通过间接或直接检测报告基因编码产物的信号，比如报告蛋白、mRNA、酶等，直观反映细胞内基因的转录活性或表达水平。一般报告基因的特点是无毒、无免疫原性、易于检测、具有一定的特异性。报告基因编码产物的半衰期是比较关注的一个关键点。编码产物半衰期和报告基因的应用领域息息相关。[1]
那么报告基因该如何选择呢？在选择报告基因时一般基于以下几个原则，对宿主的影响，内源性活性影响以及方法是否成熟等。目前报告基因大致分为四类[2][3]，不同的报告基因有着不同的优缺点（表1）。下面就几种不同的报告基因做出举例介绍。
二，报告基因的种类及优势
| 报告基因类别 | 优势 |
| 无底物发射荧光(如荧光蛋白基因) | 1.相对分子质量小、荧光较稳定、对活细胞无害、检测方法容易; 2.可以在同一个细胞中检测到绿色荧光蛋白和蓝色突变体 |
| 与放射性或荧光底物相互作用（如荧光素酶） | 1.方便快捷，高灵敏度; 2.线性范围较大，背景极低，分析方法相对简单。 |
| 转运为基础的报告基因（如氯霉素乙酰转移酶基因） | 1.表达产物比较稳定; 2.氯毒素乙酷转移酶在真核细胞中的本底很低，结果重现性好，且灵敏度高，是真核基因表达调控研究中最早使用的报告基因之一。 |
| 膜锚定受体或抗体（如膜锚定荧光素酶） | 1.高灵敏度; 2.检测信号在细胞外不受细胞内源物质影响。 |
荧光素酶报告基因
在生物医药行业最主要的报告基因为荧光素酶报告基因。最常见的荧光素酶 （luciferase）基因来源于萤火虫。萤火虫萤光素酶在ATP、氧气和Mg2+存在条件下，催化萤光素的氧化羧化，释放出光信号，这是任何已知生物发光系统中效率较高的发光反应，因而被设计用来检测和定量哺乳动物细胞中萤火虫萤光素酶的表达。相对于其他报告基因，萤光素酶具有诸多优势：检测灵敏度高，型号稳定性好，操作方便。
CHASELECTION逐典萤光素酶报告基因检测试剂盒旨在准确、灵敏、高效地测定萤火虫萤光素酶活性，应用高通量药物筛选、药物活性检测、大规模启动子功能测定、信号通路等研究。
逐典萤光素酶报告基因
针对报告基因检测不同的侧重需求，逐典推出了3种检测系统。
逐典萤光素酶报告基因特点：
1. 检测灵敏度高，信号稳定性好
HEK293-NFK B-LUC细胞加入梯度稀释的TNF 在37C、5%CO条件下刺激6小时后,分别用增强型、超敏型、稳定型检测试剂进行信号检测。
2. 操作方便
仅需将底物和萤光素酶检测缓冲液混合后直接加入到细胞即可。
3. 稳定性好
同时在10次反复冻融实验中，逐典全系列报告基因检测试剂盒显示出较强的稳定性。
