细胞消化酶的选择

在贴壁细胞培养过程中，消化液的选择至关重要，它直接影响着细胞的质量、活性、后续实验结果以及研究的可靠性。在细胞培养中选择细胞消化酶需要考虑多个因素:

一、根据细胞类型选择

l 贴壁强度不同的细胞：

对于贴壁牢固的细胞，如成纤维细胞等，通常需要较强的消化酶来使其从培养容器表面分离。胰蛋白酶是常用的选择，它能够水解细胞间的蛋白质，破坏细胞与培养表面的黏附。一般使用浓度为0.25% - 0.5%的胰蛋白酶溶液来消化成纤维细胞。

对于贴壁相对较弱的细胞，如一些上皮细胞等，可能需要较温和的消化酶或较低浓度的胰蛋白酶。例如，可以使用浓度为0.05% - 0.1%的胰蛋白酶，或者选择一些相对温和的消化酶如胶原酶等。胶原酶主要作用于细胞外基质中的胶原蛋白，对细胞的损伤相对较小，更适合消化贴壁不太牢固的上皮细胞等。

l 不同来源的细胞：

原代细胞通常比细胞系更脆弱，对消化酶的敏感性也不同。对于原代细胞，如从组织中分离得到的肝细胞等，可能需要更加温和的消化条件。可以选择分散酶（Dispase）等。分散酶能够分解细胞外基质中的粘连蛋白等成分，使细胞分离，同时对细胞的损伤较小，有利于保持原代细胞的活性和功能。

二、根据实验目的选择

l 细胞传代培养：

在常规的细胞传代培养中，胰蛋白酶是常用的消化酶。它作用迅速，能够在较短时间内使细胞从培养容器表面脱离，便于进行细胞的分散和传代操作。例如，对于许多常见的细胞系，如HeLa细胞、HEK293细胞等，在传代培养时使用合适浓度的胰蛋白酶可以有效地分离细胞，实现细胞的扩增。

然而，如果实验关注的是细胞表面分子的完整性或细胞的某些特殊功能，可能需要选择更温和的消化酶。比如在研究细胞表面受体功能的实验中，为了尽量减少消化酶对细胞表面受体的影响，可以选择胶原酶或分散酶等相对温和的酶进行细胞消化，以保持细胞表面分子的天然状态。

三、考虑消化酶的特性

l 作用时间和温度：

不同的消化酶具有不同的最佳作用时间和温度。胰蛋白酶一般在37℃下作用效果较好，作用时间通常在几分钟到十几分钟不等，具体取决于细胞类型和胰蛋白酶的浓度。例如，对于某些快速生长的细胞系，可能在37℃下用0.25%胰蛋白酶消化5 - 10分钟即可。

胶原酶的作用相对较温和，可能需要在37℃下作用较长时间，有时甚至需要30分钟到1小时左右。了解并掌握所选择消化酶的合适作用时间和温度，对于有效消化细胞且避免过度消化导致细胞损伤至关重要。

l 酶的纯度和质量：

选择高质量、高纯度的消化酶对于细胞培养的成功至关重要。低质量的消化酶可能含有杂质，这些杂质可能会对细胞产生不良影响，如影响细胞生长、代谢或导致细胞死亡等。

购买消化酶时应选择信誉良好的供应商，并查看产品的质量认证等相关信息。例如，一些品牌的胰蛋白酶通常具有严格的质量控制标准，其纯度高、活性稳定，能够为细胞培养提供可靠的保障。同时，高质量的消化酶也有助于提高实验结果的重复性和可靠性。

综上所述，在细胞培养中选择细胞消化酶需要综合考虑细胞类型、实验目的以及消化酶的特性等多个因素，以选择最合适的消化酶来确保细胞培养的成功和实验的顺利进行。

胰蛋白酶在贴壁细胞消化中的弊端

一、对细胞的潜在损伤

l 破坏细胞表面蛋白：

胰蛋白酶在消化细胞过程中，可能过度水解细胞表面的蛋白质，如一些重要的细胞表面受体、黏附分子等。例如细胞表面的整合素等黏附分子对于细胞与细胞外基质的黏附以及细胞间的相互作用至关重要，胰蛋白酶的作用可能导致这些黏附分子结构改变或功能丧失，进而影响细胞的黏附、迁移和信号传导等正常生理功能。细胞表面的生长因子受体等也可能受影响，干扰细胞对外界生长因子信号的接收和响应，影响细胞的增殖和分化等过程。

l 降低细胞活力：

过度消化或不适当的胰蛋白酶处理可能会对细胞造成机械性损伤。当胰蛋白酶作用时间过长或浓度过高时，细胞可能会变得脆弱甚至破裂。这种损伤可能导致细胞内容物泄漏，影响细胞的代谢平衡，进而降低细胞活力。例如，细胞质中的酶、离子等物质泄漏可能干扰细胞内正常的生化反应，对细胞的生存和功能产生不利影响。受损的细胞在后续的培养过程中可能生长缓慢或出现形态异常，甚至可能无法继续存活。

二、消化条件的严格要求

l 精确的浓度和时间控制：

胰蛋白酶消化细胞时，其浓度和作用时间需要精确控制。不同类型的细胞对胰蛋白酶的敏感性不同，合适的消化条件差异较大。如果胰蛋白酶浓度过高或作用时间过长，会导致细胞过度消化，如细胞聚集成团、细胞膜损伤等问题。相反，如果浓度过低或作用时间过短，则可能无法有效地使细胞从培养器皿表面分离，影响细胞的传代和后续实验操作。例如，对于某些敏感的细胞系，胰蛋白酶浓度可能需要精确控制在0.05% - 0.1%，作用时间在几分钟之内；而对于一些贴壁较牢固的细胞，胰蛋白酶浓度可能需要提高到0.25%，但作用时间也需要严格监控，以避免过度消化。

l 对温度和pH值的敏感性：

胰蛋白酶的活性受温度和pH值影响较大。一般在37℃、pH值在7.2 - 7.4时活性较强。在细胞消化过程中，如果温度或pH值偏离适宜范围，胰蛋白酶的消化效果可能会受到影响，甚至可能导致消化不均匀或对细胞造成额外的损伤。例如，在温度过低时，胰蛋白酶活性下降，消化时间会延长，可能增加细胞在消化过程中遭受不良环境影响的风险；而在pH值过高或过低时，胰蛋白酶的构象可能发生改变，活性降低，无法有效地消化细胞，同时可能对细胞产生其他不良影响。

三、可能引入杂质或病原体

l 胰蛋白酶来源的问题：

胰蛋白酶通常来源于动物（如猪或牛）的胰脏，其提取和制备过程中可能存在杂质或潜在的病原体污染风险。虽然经过一定的纯化处理，但仍可能残留一些动物源性的蛋白质、病毒或其他有害物质。例如，动物源的病毒如果没有被去除，可能会传播给培养的细胞，影响细胞的正常生长和实验结果的准确性，甚至对后续的应用带来安全隐患。此外，动物源的胰蛋白酶可能会引起一些免疫反应相关的问题，尤其是在一些涉及体内细胞实验或细胞治疗等应用中，可能会引发宿主的免疫排斥反应。

四、批次间差异：

不同批次的胰蛋白酶在活性、纯度等方面可能存在差异。这种批次间的不一致性可能会影响细胞消化的效果和实验结果的重复性。例如，某一批次的胰蛋白酶可能由于生产过程中的细微变化，导致其消化能力较弱，需要延长消化时间或增加浓度才能达到与上一批次相同的消化效果，这给实验的标准化和可重复性带来了挑战。在进行大规模细胞培养或长期的实验研究时，批次间差异可能会累积，对实验结果产生更显著的影响。

逐典生物TrypLUS消化液的优势

TrypLUS消化液是一种利用微生物重组表达的胰蛋白酶类似酶，对传统胰蛋白酶在稳定性、纯度以及使用便捷度上实现了超越。其最大特点在于无需使用胰酶抑制剂来终止消化过程。传统的胰蛋白酶消化后，需加入胰酶抑制剂（如EDTA）来中和酶的活性，终止消化。而TrypLUS消化液则可直接用PBS稀释来终止消化，简化了操作步骤，更避免了与血清的直接接触。血清中的复杂成分可能干扰细胞生理功能，甚至改变细胞分裂状态。因此，避免与血清的直接接触有助于保护细胞的生理状态，确保实验的准确性。

l 温和消化，保护细胞

TrypLUS消化液通常采用了更温和的成分组合，能够在有效消化细胞使其从培养表面脱离的同时，减少对细胞的损伤。与胰蛋白酶相比，它对细胞表面蛋白和受体的破坏作用较小，有助于保持细胞的完整性和正常生理功能。例如，在消化一些敏感的细胞类型如干细胞时，TrypLUS消化液能够使细胞更顺利地分离，且细胞在消化后的活力和功能状态相对较好，减少了因消化过程导致的细胞死亡和功能受损情况。

l 消化条件相对宽松

TrypLUS消化液对消化条件的要求相对不那么严格。它在一定范围的温度和pH值下都能保持较为稳定的消化效果，不像胰蛋白酶对温度和pH值那么敏感。这使得实验操作更加方便，减少了因温度或pH值微小波动而对消化效果产生的不良影响。例如，在一些实验室环境中，温度或pH值可能存在一定的波动，TrypLUS消化液能够在相对较宽的条件范围内有效工作，降低了对实验环境精确控制的要求，提高了实验的成功率和可重复性。

l 成分稳定，批次差异小

TrypLUS消化液的生产工艺通常能够保证其成分的稳定性，批次间差异相对较小。这对于需要长期、大规模进行细胞培养和实验研究的情况非常有利。实验人员可以更准确地预测和控制消化效果，避免了因胰蛋白酶等试剂批次间差异导致的实验结果不稳定问题。例如，在药物筛选等需要大量重复实验的研究中，TrypLUS消化液能够提供更可靠的细胞消化结果，确保不同批次实验之间的可比性，提高研究的准确性和可信度。

l 降低污染风险

由于TrypLUS消化液通常采用非动物源性成分或经过严格处理的成分，其带来病原体污染的风险大大降低。这对于细胞培养的生物安全性至关重要，尤其是在一些对细胞质量要求较高的应用领域，如细胞治疗和再生医学等。避免了动物源胰蛋白酶可能存在的病毒、朊病毒等污染风险，为细胞产品的临床应用提供了更安全的保障。

逐典生物TrypLUS消化液客户应用案例

产品订购信息

【关于逐典】

上海逐典生物科技有限公司，坐落于中国（上海）自由贸易试验区，获得ISO9001质量体系认证，是一家从事重组蛋白研发和销售的高新科技企业。

逐典生物始终秉持以客户为中心的理念，针对重组蛋白的结构设计、纯化工艺及其稳定剂型相关的多项关键技术进行突破。定向蛋白变复性技术，可将大肠杆菌大量表达的变性固体蛋白转变成高活性可溶性蛋白。凭借技术优势，逐典生物新品研发周期短且可控性强，为重组蛋白的高质高效研发提供保障，为企业生产降本增效。

公司自成立以来成功开发百余种高活性细胞因子及多种高活性蛋白酶，覆盖细胞培养、病毒纯化以及质量分析等生物工艺各个环节。可广泛应用于科研、医药生产及IVD（体外诊断试剂）等领域，满足各类用户所需。