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非病毒细胞转染方法|Lonza Necleofector入核电转技术

时间:2024-11-19      阅读:62

///Lonza Nucleofector

超高引用值得信赖

非病毒转染


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Nucleofector电转技术



细胞转染有许多不同的方式,常用于实验室的就是脂质体转染、病毒转染以及电穿孔法。

传统的电穿孔技术需要摸索步骤进行优化,转染位置为胞质,细胞毒性大,转染效率难以得到保证。但Lonza公司对电穿孔技术进行了优化,通过配合高效率的细胞转染液、预置的优化好的转染程序,直接将外源基因导入目标细胞,实现更高转染效率、更高细胞存活率,最快在转染2小时后就能观察到转染基因的蛋白表达。


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原理与优势




Nucleofector技术原理:高效的非病毒的DNA转运,适用于原代细胞或是细胞系,可直接转运入细胞核。

主要优势:

· 基因转染效率高

· 转染与细胞分裂无关

· 可实现非分裂细胞的转染,如神经元细胞

· 更快的基因表达

· 通用性:可转染质粒DNA,DNA单链,mRNA或是siRNA,可适用于原代细胞或是细胞系。




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不同转染模块




Core Unit:核心模块,控制系统,能够加载程序,实现细胞转染功能。





X Unit:能够实现悬浮细胞的转染,可以以20ul,100ul的体系进行转染。





Y Unit:能够实现贴壁细胞的转染,可直接在24孔板内进行转染。





96-well Unit:可在96孔板内进行检测,可应用于原代细胞以及难转染细胞。


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实验步骤简单






Step 1:将目标细胞从培养皿或培养瓶中收集起来。







Step 2:将细胞与转染试剂、需转入的物质(DNA或siRNA)混匀,并转入电极杯中。







Step 3:选择合适的程序,将电极杯或电极条插入仪器中,按下Start按钮。







Step 4:用培养基冲洗,将细胞冲洗下来






Step 5:将冲洗后的培养基转移至培养皿中,在一定时间后即可检测转染效率。


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基因表达快速











TMR标记的DNA表达eGFP的质粒转染新生儿皮肤成纤维细胞(NHDF-neo),两小时后用 3.5%PFA固定,共聚焦显微镜可观察到GFP蛋白在细胞核内表达。

05


应用领域多样








免疫、肿瘤、代谢、神经等研究领域的不同细胞,难以进行转染的细胞、无法分裂的细胞,都可以实施转染。

06提供多种工具






从转染方法到细胞培养知识,不同的转染细胞种类,适用的不同转染方法,都能在Lonza找到答案。


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