摘要：本应用简报展示了基于质量源于设计 (QbD) 原则分离氨氯地平及其已知 EP 杂质的 UHPLC 方法。第二步，将该方法转换并转移到 HPLC 系统中。利用安 捷伦仪器控制框架 (ICF) 作为接口，通过 Waters Empower 3 色谱数据处理系统 (CDS) 控制 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱仪。系统集成了 Fusion QbD (S-Matrix Corp, Eureka, CA) 软件，以实现基于 QbD 的方法开发过程。 使用免费方法转换工具将 UHPLC 条件下在亚 2 µm 色谱柱上开发的方法转移 至利用 HPLC 系统的常规 QA/QC 工作流程。在进一步优化和评估过程中，使 用 Agilent 1290 Infinity II 方法开发系统上的安捷伦智能系统模拟技术 (ISET) 对 目标 HPLC 系统的性能特点进行模拟。在转移至目标系统后，满足所有关键 方法属性 (CMA)，并对重现性进行了验证。

 前言 ：满足 ICH Q8 (R2) 和 ICH Q2 (R2) 指导原 则的基于质量源于设计 (QbD) 的方法 开发及方法验证越来越受到制药分析 研发领域的关注2 。在不同色谱柱固定 相的筛选过程中，在较短的亚 2 µm 色 谱柱上使用 UHPLC 方法可显著提高柱 效。然而，开发完成后需要将终方 法转移至 QA/QC 部门，而该部门中的 大部分液相色谱系统为传统 HPLC 系 统。在不影响关键方法属性 (CMA) 的 前提下从 UHPLC 向 HPLC 进行方法转 移是一个具有挑战性的过程2 。由于 系统延迟体积和梯度混合精度存在差 异，因此即使在 UHPLC 系统中采用传 统 HPLC 色谱柱开发的方法，在转移 至 HPLC 系统后仍无法确保性能* 相同。为克服这些问题，安捷伦开发 出安捷伦智能系统模拟技术 (ISET)， 以模拟常用目标系统的特性3 。 本应用简报展示了作为基于 QbD 的稳 定方法开发过程的通用 UHPLC 解决方 案的 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱仪 的使用，以及第三方 QbD 软件 (Fusion QbD) 与 Waters Empower 3 CDS 控制下 的 1290 Infinity II 液相色谱仪的使用。 后，还展示了安捷伦 ISET 如何模拟 QA/QC 环境下常用的处于第三方软件 控制下的不同目标液相色谱系统的性 能特点。

 实验部分 ：仪器 利用 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱方 法开发系统进行方法开发。1290 Infinity II 方法开发解决方案的各个模块和组 件包括： • Agilent 1290 Infinity 阀驱动 (G1170A) 和 12 位/13 通溶剂选 择阀 (G4235A) • Agilent 1290 Infinity II 高速泵 (G7120A) • Agilent 1290 Infinity II Multisampler (G7167B)，保持在 4 °C • Agilent 1290 Infinity II 高容量柱温 箱 (G7116B)，配备 8 位/18 通色 谱柱选择阀 (5067-4233) • Agilent 1290 Infinity II 二极管阵列 检测器 (G7117B) 

 所有 Agilent 1290 Infinity II 模块的低固件要求为：B、C 和 D.06.70。利用 Agilent 1260 Infinity 液相色谱仪对 转移后方法的重现性进行验证。1260 Infinity 液相色谱仪的各个模块包括： • Agilent 1260 Infinity 二元泵 (G1312B) • Agilent 1260 Infinity 自动进样器 (G1367E) • Agilent 1260 Infinity 柱温箱 (G1316A) • Agilent 1260 Infinity 二极管阵列 检测器 (G4212B)

软件 • Fusion QbD 自动化液相色谱方法 开发软件 (S-Matrix Corp, Eureka, CA)（版本：9.7.1，Build 458） • Waters Empower 软件（版本 3 build 3471），配备系统适用性测 试包 • 沃特世仪器控制软件 (ICS) 2.1 HF1 包括安捷伦 ICF 和驱动程序 包 (A.02.03 DU1 HF2) • ISET 4（驱动程序版本 A.02.11）

试剂与样品 所有溶剂均为 HPLC 级 (RCI Labscan Ltd, Thailand)。苯磺酸氨氯地平 (API) 标准品以及已知的 EP 杂质 A、B、D、 E、F 和 G 购自印度 Anant Pharmaceuticals Pvt Ltd。在整个实验中，按照欧洲药 典 (EP) 规定的苯磺酸氨氯地平样品前 处理方案进行操作，其中在 API 中加 入已知杂质4 。 工作流程 方法开发工作流程以筛选过程作为起 始，通过筛选七种短亚 2 µm 色谱柱组 合两种有机溶剂和七种不同 pH 值水 相溶剂的液相，确定苯磺酸氨氯地平 标准品和杂质分析的佳色谱分离条 件。使用在 Empower 3 控制下的 1290 Infinity II 液相色谱方法开发系统和 Fusion QbD 软件，进行该色谱柱固定 相的筛选实验（图 2）。对于初始筛选 阶段发现的佳色谱条件（满足筛选 阶段的分析目标概况 (ATP) 要求），通 过多变量统计实验根据 QbD 原理创建 设计空间来进一步完整优化，从而形 成稳定的 UHPLC 方法（满足优化阶段 的 ATP 要求）。 第二步，将该 UHPLC 方法转移至填料 粒径不同的两根 HPLC 色谱柱上。为 了模拟目标系统的性能特点，Agilent 1290 Infinity II UHPLC 在启用 ISET 工 具后，即在模拟模式下运行。模拟 Agilent 1260 Infinity 系统的梯度混合行 为和自动进样器延迟体积。 将 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱仪在 模拟模式下的性能结果与目标系统的 结果进行比较。确定系统适用性杂 质（杂质 B 和 G）和 API 的保留时间 (RT)、峰面积和分离度的重现性

 ……

结论 利用安捷伦仪器控制框架 (ICF) 软件作 为接口，通过 Waters Empower 3 色谱 数据处理系统、Waters ICS 和 Fusion QbD 软件控制 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱仪，可开发出快速而稳定的 UHPLC 方法。根据 QbD 原理，在优化 后生成设计空间。根据可接受标准对 五点设计空间进行验证，结果表明空 间满足所有标准。CMA 的预测值与实 验值相符。方法满足系统适用性要求 （杂质 B 和 G 的分离度 > 2），且所有色 谱峰在 3.7 分钟的梯度时间内均达到了 基线分离。终 UHPLC 方法具有重现 性（API 和杂质 G 峰面积 RSD < 0.5） 与稳定性。 使用安捷伦 ISET 技术实现了从 Agilent 1290 Infinity II UHPLC 系统到 Agilent 1260 Infinity 系统的无缝方法转换。该方法 可适应目标系统的压力限值。对模拟 模式下的结果与目标系统的结果进 行了比较。结果证明，将 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱仪、ISET、ICF 以及 第三方 CDS 和 Fusion QbD 相结合，可 实现方法开发、QbD 原理和方法转移。