前言:氮哌酮 (Azaperone) 是一种丁酰苯类神经安定药，动物经肌肉注射此药后可消 除紧张感、降低活动力，使动物对环境淡漠并长期处于安静状态，在长途运输 中常常给猪等动物使用该药。氮哌醇 (Azaperol) 是氮哌酮在动物体内的代谢产 物，与原形药物氮哌酮的化学结构相近。通过食物链，氮哌酮及其代谢产物氮 哌醇会在人体内蓄积，对人体产生直接的危害，其不良反应主要体现为心血管 效应，用药后动脉压下降，皮肤血管扩张使皮肤成粉红色，心率和心输出量 减少。 本文所述方法参照 GB29709-2013，建立了动物源食品中氮哌酮及其代谢物分析 的高效液相色谱法。本方法适用于猪的肌肉、肝、肾中氮哌酮和氮哌醇残留量 的检测。方法利用 Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱对样品进行净化，并 利用安捷伦的 Agilent Poroshell 120 EC-C18 快速柱对目标物进行快速分析。

氮哌酮及其代谢物分析 对试样进行样品前处理：称取 5 ± 0.05 g 试样于 50 mL 离心管中，加 10 mL 乙腈， 涡旋 1 min，超声 10 min，5000 r/min 离心 5 min，取上清液于 50 mL 离心管中； 残渣中加 10 mL 乙腈，重复提取一次，合并两次提取液，于 45 °C 氮气吹扫至近 干；加 5 mL 2% 甲酸水溶液于离心管中，涡旋 1 min，超声 5 min 使充分溶解，加 10 mL 正己烷，振荡 5 min，5000 r/min 离心 5 min，弃掉上层正己烷层（包含两相 间的脂肪膜），用氮气吹扫去除残余的正己烷，备用。

所得样品提取液经 Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱 净化和富集后（图 1 所示为固相萃取操作流程），使用配备 了 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色谱柱的高效液相色谱系统 对其中的氮哌酮及其代谢物进行快速分析（表 1 所示为高 效液相色谱分析条件）。

本方法在 GB29709-2013 基础上进行了前处理和检测方法 的优化，在保证目标物回收率的情况下，显著降低了各种 组织来源的本底干扰，能获得更低的检测限，同时使分析 方法更加稳定准确，如图 2-4 所示。方法中利用 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱对样品进行净化，并利用安捷伦的 Poroshell 120 EC-C18 快速柱对目标物进行快速分析， 方法检测限为 2 µg/kg，定量限为 5 µg/kg；50 µg/kg 加标 水平的猪肾样品连续进样六次考察重现性，氮哌醇峰面积 RSD 值为 0.76%，氮哌酮峰面积 RSD 值为 0.53%，结果表现 出*的重现性，如图 5 所示；在 12.5-1000 ng/mL 线性范 围内氮哌醇和伊氮哌酮的线性相关性良好，如图 6 所示； 在 5-100 µg/kg 的加标水平下，氮哌酮和氮哌醇的回收率为 58.9%-83.8%，RSD 为 0.9%-7%，如表 2-3 所示。

本方法与 GB 29709-2013 相比，采用了 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱对样品进行净化，并利用安捷伦的 Poroshell 120 EC-C18 快速柱对目标物进行快速分析。Plexa PCX 填料是新型的高级聚合物阳离子交换填料，具有更高 的萃取效率。Poroshell 120 EC-C18 快速柱与常规分析柱相比， 在提高柱效的同时显著地缩短了分析时间，这在高通量检 测方面有重要意义。本方法简化了萃取净化的步骤，提高了前处理和色谱分析效率，*国家标准方法要求的 检测限和定量限，获得了较高的回收率与稳定性。因此采 用 Bond Elut Plexa PCX 固相萃取小柱和 Poroshell 120 EC-C18 色谱柱，能够满足 GB29709-2013 规定的对动物源食品中氮 哌酮及其代谢物的测定要求。