前言：本应用简报使用正离子电喷雾模式 (ESI+) 与一般梯度，对高 pH 和 低 pH 条件下的 LC/MS 分析几种滥用药物相关化合物进行了对比。人们通常认为分析物分子的离子化状态将取 决于流动相的 pH，使用高 pH 流动相时，LC/MS 在正离子电喷雾模式下的离子化效率将 显著降低，因为此时化合物呈中性。然而，许多研究人员对不同类型的样品（包括蛋白 质、多肽和氨基酸）进行研究后发现，离子化效率对流动相 pH 的增加不敏感，灵敏度甚 至还有所提高 [1-6]。在 ESI+ 模式下，高 pH 流动相并不会抑制碱性化合物的离子化； 相反会形成大量正离子，而且在高 pH 条件下得到的分析物响应通常比低 pH 酸性流动相 下的响应更高。这一发现非常重要，因为它将普通洗脱方法的适用性扩展至此前难以保 留的极性碱性化合物的分析。 然而结果表明，许多可在高 pH 下使用的条件会损坏传统的硅胶 HPLC 色谱柱。使用 Agilent Poroshell HPH C18 等可在高 pH 条件下保持稳定的新型色谱柱，无需牺牲色谱 柱使用寿命即可通过控制 pH 来调整选择性和灵敏度。色谱工作者可通过这些色谱柱在方 法开发中采用表面多孔颗粒技术探索更宽的 pH 范围，表面多孔颗粒技术以其高效和快速 的特点得到了越来越多的应用 [7]。

实验部分：实验采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱与 Agilent 6460 三重四极杆质谱仪的联用系统，该系统包括： • Agilent 1290 Infinity 二元泵，耐压高达 1200 bar (G4220A)， 通过在溶剂旁路阀中采用 PEEK 密封垫进行改良（PEEK FL 转子密封垫部件号 5068-0171） • Agilent 1290 Infinity 柱温箱 (TCC) (G1316C) • Agilent 1290 Infinity 高性能自动进样器 (G4226A)，配备 PEEK 转子密封垫（PEEK FL 转子密封垫部件号 5068-0170） • Agilent Poroshell HPH C18, 3 × 100 mm, 4 µm

PEEK FL 密封垫应与碳酸氢铵缓冲液配套使用。Agilent 1290 系列仪器中的标准转子密封垫由 Vespel 制成，仅支持有限的 pH 范 围 (1 - 10)。PEEK FL 转子密封垫则由特殊的 PEEK 混合材料制成， 适用于更宽的 pH 范围 (1.0 - 12.5)。将 UHPLC 安装在 A-line 机架 上。该系统采用 0.075 µm 管线连接以最大限度减少扩散。这将产 生高于传统 0.12 mm 或 0.17 mm 内径管线的反压，但这并不会产 生问题，因为 4 µm Poroshell HPH C18 柱产生的反压极小。表 1 列出了 MRM 离子对与监测离子。 将甲酸铵和甲酸配制为 5 mM 的溶液，并用其配制 pH 为 3 的低 pH 缓冲液。甲酸铵购自 Sigma-Aldrich 公司，二次蒸馏甲酸购自 GFS。利用碳酸氢铵和氢氧化铵配制 pH 为 10.5 的缓冲液，这两 种化合物均由 Sigma-Aldrich 提供。

结果与讨论 在本应用简报中，对以上化合物在碱性流动相和酸性流动相中的 洗脱行为进行比较，结果发现碱类在碱性流动相中的保留时间更 长。碱性化合物被*质子化，在反相 HPLC 中的保留特性优于 带电化合物。由于这些化合物具有更出色的保留特性，因此可进 行更多的溶剂调节以获得峰间距，如图 1 所示。梯度和 流动相条件如图 1 中所述。总的来说，某些分析物在碱性溶剂中 比在酸性流动相中具有更大的色谱峰。与曲唑酮、维拉帕米、普罗地芬相关的峰在碱性流动相中明显增大。这可能是由 于 pH 的影响，但也可能是由于化合物保留时间较长以及采用更 强的有机流动相进行洗脱。

结论 此前的研究表明，Agilent Poroshell HPH-C18 能够在高 pH 流动 相（例如 pH 为 10 的碳酸氢铵缓冲液）中长时间使用（进样 2000 次以上）。因此，色谱工作者如今可在方法开发中采用表面 多孔颗粒技术探索更宽的 pH 范围，而表面多孔颗粒技术也以其 高效和快速的特点得到了越来越多的应用。高 pH 流动相与表面 多孔颗粒的配合使用既有益又实用 [8]。