摘要：Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统中的安捷伦智能系统模拟技术 (ISET) 能更加方便地 将分析方法从 Agilent 1100 系列二元液相色谱系统等传统 HPLC 系统中进行转移。本应 用简报举例证实了 ISET 在分析六种三环抗抑郁药方面的优势。在 1290 Infinity II 液相色 谱系统中，与未启用 ISET 相比，启用 ISET 时可以获得 99% 的保留时间一致性。

前言：安捷伦智能系统模拟技术 (ISET) 能够模拟 不同液相色谱系统，从而实现分析方法在仪 器间的无缝转移1,2。无需更改原始方法，仅 通过增加等度步骤等途径就能得到相同的色 谱分析结果，从而使液相色谱分析方法的无 缝转移成为可能。这使得用户在运行原先的 方法时无需对仪器或方法做任何改动，也让 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统成为真 正能够运行其他 HPLC 和 UHPLC 方法的通用 系统。而用户也能够选择从 1290 Infinity II 液相色谱系统广阔的能力范围与性能 中受益。 三环抗抑郁药是*用于治疗抑郁症的镇静 剂之一。此类药物得名于其化学结构中特征 性的三环。所有成分均有情绪增强的功效， 通常在服药 2 - 4 周后明显见效。三环抗抑 郁药能够抑制脑内的神经元对神经递质血清 素、去甲肾上腺素和多巴胺的再摄取。抑郁 症患者的特点就是脑中上述神经递质的浓度 均过低。三环抗抑郁药对神经递质利用率的 提高有助于抵消神经递质缺乏带来的影响。 三环抗抑郁药的分析在临床化学与法医毒理 学领域均非常重要。高效液相色谱 (HPLC) 是通常用于血清、血液或尿液样品鉴定和定 量分析的稳定而可靠的工具。 本应用简报介绍了六种三环抗抑郁药混合物 的分离方法。分析结果证明，无需改动原方 法即可将 1100 系列二元液相色谱系统中的 方法轻松转移至 1290 Infinity II 液相色谱系 统中；还证明了启用 ISET 功能即可使保留 时间保持不变。

实验部分 仪器 所有实验均在 1100 系列二元液相色谱系统 和 1290 Infinity II 液相色谱系统中完成，两 台系统分别包括以下模块。 Agilent 1100 系列二元液相色谱系统： • Agilent 1100 二元泵 (G1312A) • Agilent 1100 自动进样器 (G1313A) • Agilent 1100 柱温箱 (G1316A) • Agilent 1100 二极管阵列检测器 (G1315B) Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统： • Agilent 1290 Infinity II 高速泵 (G7120A) • Agilent 1290 Infinity II Multisampler (G7167B) • Agilent 1290 Infinity II 高容量柱温 箱 (G7116B) • Agilent 1290 Infinity II 二极管阵列检 测器 (G7117B)

色谱柱 Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18, 4.6 × 75 mm, 3.5 µm（部件号 966967-902） 软件 Agilent OpenLab CDS ChemStation，LC 和 LC/MS 系统版，修订版 C.01.07 [采用 ISET 4 的 22] 样品 六种三环抗抑郁药混合物（按洗脱顺序排 列）：普罗替林、曲米帕明、去甲替林、丙咪嗪。 化学品 所有试剂均为液相色谱级。甲醇购自德国 Merck 公司。新制超纯水产自配置 LC-Pak Polisher 和 0.22 µm 膜式终端过滤器 (Millipak) 的 Milli-Q Integral 水纯化系统。碳酸氢铵和 三环抗抑郁药购自 Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, U.S)。

结果与讨论 三环抗抑郁药的分析选用传统方法，方法具 体内容已在 2002 年的安捷伦应用简报中进 行了介绍3 。该方法采用 4.6 × 75 mm、装填 3.5 µm 颗粒的传统 HPLC 色谱柱。将该方法 分别用于 1100 系列二元液相色谱系统、未采 用 ISET 的 1290 Infinity II 液相色谱系统以及 采用了 ISET 的 1290 Infinity II 液相色谱系统 中。通常将分析方法由传统仪器向 UHPLC 系统进行转移时会出现问题，这些出现的 问题是由混合行为差异以及现代 UHPLC 系 统的延迟体积和过渡体积显著降低造成的 （图 1）。与 1100 系列二元液相色谱系统相 比，六种三环抗抑郁药在 1290 Infinity II 液 相色谱系统中的保留时间更短。其他所有现 代 UHPLC 仪器在运行传统的液相色谱方法时 都会同样出现类似现象。 一般用两种途径来解决这一问题： 1. 在梯度洗脱的起始阶段增加等度洗脱步骤 2. 通过增加额外管线增大延迟体积 上述两种方法均可补偿较小的延迟体积，但 并不影响混合性能或过渡体积。在不进行任 何补偿的情况下，全部六种分析物的保留时 间偏移范围介于 6% - 9% 之间（表 2）。图 2 显示从 1100 系列二元液相色谱系统向启用 ISET 与未启用 ISET 的 1290 Infinity II 液相 色谱系统进行的方法转移。 启用 ISET 后，保留时间与原色谱图具有良 好的一致性。与未启用 ISET 的 1290 Infinity II 液相色谱系统相比，启用后全部所分析化 合物的保留时间偏差均小于 1%（表 2 右侧 列）。智能系统模拟技术中规定的允许偏差 为 5% 以下4 。

从保留时间和峰面积的精密度方面来看，采 用 ISET 的 1290 Infinity II 液相色谱系统明 显优于 1100 系列液相色谱系统（表 3）。

结论 模拟其他 HPLC 或 UHPLC 仪器时，Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统具备的 ISET 功 能使得用户无需改动仪器或方法即可运行现 有 HPLC 或 UHPLC 方法，并能够获得高度一 致的色谱图（保留时间一致性高于 99%）。 在 Agilent 1100 系列二元液相色谱系统与 启用 ISET 的 Agilent 1290 Infinity II 液相 色谱系统中分别采用传统方法分析六种三环 抗抑郁药所得到的结果证明了上述结论。此 外，保留时间和峰面积的精密度也得到了明 显提升。