重组蛋白纯化的工艺过程
时间：2024-12-23 阅读：59
重组蛋白纯化是生物制药过程中的关键步骤，其目的在于从复杂的生物混合物中提取出高纯度的目标蛋白。重组蛋白纯化的工艺过程涉及多个阶段，以下是对这些阶段的详细介绍：
1.样品准备
预处理：在准备好所有设备及耗材后，对目的蛋白进行预处理，去除杂质、组织、脂肪等，保证样品的生物活性。
裂解细胞：如果目标蛋白存在于细胞内，需要通过机械或化学方法裂解细胞，释放出目标蛋白。
2.初步分离
离心：利用离心技术将大部分细胞碎片和未破裂的细胞分离出去。
过滤：通过过滤器进一步去除较大的杂质颗粒。
3.层析法纯化
离子交换色谱：基于蛋白质表面的电荷差异进行分离。
凝胶色谱：根据蛋白质分子的大小和形状进行分离。
亲和色谱：利用特异性配体与目标蛋白之间的亲和力进行分离。
疏水相互作用色谱：基于蛋白质表面疏水性区域的差异进行分离。
4.中间纯化步骤
捕获步骤：浓缩目的蛋白，使其与有害的、宿主细胞衍生组分（如蛋白酶）分离，避免使目的蛋白发生降解。
洗涤步骤：在洗脱前采用洗涤步骤减少杂质数量。
5.精纯步骤
去除痕量杂质：使用阴离子交换或带阴离子基团的多模式层析帮助清除带负电荷的杂质，如DNA、病毒及前两个步骤中未去除的与产品有关的其他杂质。
6.验证运行
评估纯化效果：对经过纯化处理的样品进行评估，包括纯度、收率等指标的检测。