摘要

   血管性认知功能障碍（Vascular Cognitive Impairment，VCI)是di二大常见 的认知功能障碍，约占所有痴呆的20%，其中，脑白质损伤，即髓鞘或少突胶质细胞 (Oligodendrocytes，OLs)损伤是VCI重要的病理改变。近年来中枢神经系统炎症细 胞棗小胶质细胞激活与白质损伤的关系备受关注。我们前期在VCI动物模型中发 现，VCI小鼠髓鞘受损、小胶质细胞大量激活。同时，缺血引起小胶质细胞 Fractalkine/CX3CR1通路激活、CX3CR1表达上调，其下游核转录因子kB-_P50/65 (Nuclear Factor- Kappa B, NF-kB)表达升高使小胶质细胞释放更多促炎因子，并导 致认知功能障碍。因此我们提出通过调控CX3CR1相关信号通路调控小胶质细胞激 活、减轻炎症反应，从而保护OLs、促进少突胶质细胞前体细胞（Oligodendrocyte Prescusor Cells, OPCs)成熟分化修复髓鞘并改善VCI认知功能。

   本课题米用双侧颈总动脉结扎（Bilateral Common Carotid Artery Occlusion， BCCAO)术构建VCI模型，分别对CX3CR1及其通路下游关键因子NF-kB与非受 体型酪氨酸蛋白激酶Src进行拮抗。通过悬尾不动实验（Tail Suspension Test，TST) 与强迫游泳实验（Forced Swimming Test，FST)观察药物抗抑郁作用；Morris水迷宫 (Morris Water Maze，MWM)观察动物海马相关学习记忆功能改善情况。采用酶联 免疫吸附法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA)检测外周血清中炎症因子 与髓鞘相关蛋白含量，坚牢蓝（Luxol Fast Blue，LFB)染色以及免疫组织化学染色 标记髓鞘碱性蛋白(Myelin Basic Protein，MBP)分别观察胼胝体（Corpus Callosum, CC) 与海马区髓鞘损伤与修复情况，免疫组织化学法标记离子钙接头蛋白抗原（Ionized Calcium Binding Adapter Molecule 1，Iba-1)、神经胶质细胞抗原（Neuron-glial Antigen 2，NG2)、04与神经元核抗原（Neuronal Nuclei, Neun)观察海马激活小胶质细胞、 OPCs、成熟前OLs与神经元数量。采用蛋白质免疫印迹（Western Blot, WB)法对海 马区MBP含量进行检测。

   第yi部分研究表明，CX3CR1中和抗体anti-FKR干预后，VCI小鼠TST与FST不动时间明显缩短；MWM隐蔽站台实验第4天找到站台潜伏期时间明显缩短，空间 探索实验穿越目标象限的次数、在目标象限停留的时间以及在目标象限游动的路程占 总游动路程百分比均较VCI+NS组明显增加，提示拮抗CX3CR1明显改善VCI小鼠 抑郁行为与海马相关学习记忆功能。CC区LFB与免疫组织化学MBP染色相应IOD 值差异不具有统计学意义，而海马区免疫组化MBP染色以及WB分析MBP相应IOD 值明显升高，外周血清MOG含量下降，提示拮抗CX3CR1能保护海马区髓鞘并促进 髓鞘修复。拮抗CX3CR1后，海马区Iba-1阳性细胞数目明显减少，同时ELISA结 果显示VCI+anti-FKR组IL-ip与TNF-a含量较VCI+NS组明显降低，表明拮抗CX3CR1能抑制小胶质细胞激活并减轻VCI小鼠炎症反应。此外，anti-FKR稍减少 海马区NG2阳性细胞数并明显增加04与Nerni阳性细胞数，提示拮抗CX3CR1能促 进海马区OPCs成熟分化、修复受损髓鞘，并保护神经元。

    第二部分研究表明，NF-kB拮抗剂PDTC干预后，VCI小鼠TST与FST不动时 间明显缩短，而Src拮抗剂PP2上述作用并不明显。VCI+PDTC小鼠MWM隐蔽站 台实验第4天找到站台潜伏期、空间探索实验游动速度、穿越平台次数、在平台象限 停留时间、路程差异均不具有统计学意义，而VCI+PP2小鼠在隐蔽站台实验找到站 台潜伏期时间明显缩短，空间探索实验穿越目标象限的次数与在目标象限游动的路 程占总游动路程百分比均较VCI+NS组明显增加。拮抗NF-kB与Src蛋白后，CC区 LFB与MBP染色相应:[OD值比较结果显示差异均不具有统计学意义。使用PP2能 明显增加海马区MBP免疫组织化学染色IOD值，并减少外周血中MOG含量，提示 拮抗Src能保护海马区髓鞘并促进修复。与VCI+NS组相比，PDTC+NS组小鼠海马 区Iba-1阳性细胞数明显减少，血清ELISA中IL-6、TNF-a、HMGB1含量明显降低， 提示拮抗NF-kB能抑制内源性小胶质细胞激活并减轻炎症反应。与VCI+NS组相比， PP2+NS组小鼠海马区04阳性细胞数明显增加、NG2阳性细胞数稍有减少而Iba-1 与Neun阳性细胞数没有明显差异。提示拮抗Src能促进海马区OPCs成熟分化修复 髓鞘。

上述实验结果表明，CX3CR1中和抗体anti-FKR通过抑制CX3CR1通路能有效

   抑制VCI小鼠小胶质细胞激活并控制炎症反应、保护海马区神经元、促进海马区OPCs 成熟分化并修复髓鞘，从而改善缺血小鼠认知功能障碍。NF-kB抑制剂PDTC能减 少VCI动物在缺血缺氧时引起的小胶质细胞激活、缓解炎症，而Src抑制剂PP2能 减少VCI小鼠缺血缺氧时髓鞘的损伤并促进OPCs成熟分化、髓鞘修复，从而分别改 善VCI小鼠的抑郁与认知功能障碍。因此，调控CX3CR1下游的Src和域NF-kB的 作用可能是未来预防与治疗VCI潜在的重要靶点。

关键词_：血管性认知功能障碍，髓鞘，少突胶质细胞，小胶质细胞， Fractalkine/CX3CR1 通路