小鼠悬尾测试可用于筛选潜在的抗抑郁药物，并评估预期会影响抑郁相关行为的操作。测试时，用胶带将老鼠的尾巴悬挂起来，使其无法逃脱或抓住附近的物体。整个测试期通常持续时间为6分钟。悬尾实验是药物发现中一种有价值的工具，可用于高通量筛选潜在的抗抑郁化合物。今天，我们将和大家一起了解悬尾实验测试过程中的细节，并特别强调可能发生的潜在问题以及如何避免这些问题。

实验材料

悬尾箱

悬尾实验箱通常有塑料制成，尺寸通常为高55cm*宽60cm*深11.5cm，为了防止动物相关观察或互动，实验箱中间有挡板将小鼠隔开来，同时保证每只小鼠的隔间足够宽敞，小鼠不能触碰到墙壁，每个隔间大小建议不低于这个尺寸：高55cm*宽15cm*深11.5cm。小鼠的鼻子与实验箱地板之间的大致距离建议为 20-25 cm。

每个隔间顶部装有一个铝制吊杆，用于悬挂小鼠的尾巴。需要注意，如果使用大型远交小鼠品系（例如 CD-1），则需要相应增加尾部悬吊箱的各个隔室的大小。在每个隔间的底部，放置一个可拆卸移动的铝制托盘，用于收集动物的粪便或尿液。

胶带

胶带是我们日常生活中比较常见的工具，但是在悬尾测试中胶带的选择是至关重要的。胶带应牢固地粘在小鼠的尾部和吊杆上，并且强度足以承受被测小鼠的重量。同时，胶带也不应该太粘，因为我们会在每个测试结束后取下动物，避免给动物带来疼痛应激。这里，我们建议选择医用胶带，动物的尾巴皮质比较接近于人的皮肤。另外，胶带在每个小鼠尾巴粘贴的位置也要注意，尽量保持统一。

悬尾分析软件

悬尾分析软件的核心算法选择也很重要，与旷场实验等测试不同，悬尾测试不应该追踪动物的质心/重心。VisuTrack动物行为分析软件（上海欣软）通过考察小鼠四肢的真实运动情况，实时分析小鼠摇摆不动（绝望状态）、挣扎行为等指标，自动存储原始实验视频。

白噪声发生器（可选）

噪声发生器可以掩盖间歇性或者突发的环境声音。特别推荐在实验室环境中使用噪音发生器，在这些环境中可以听到可能会吓到老鼠的突然响亮的噪音。在部分实验室中，环境噪声水平（未激活白噪声发生器）约为 60 dB。在进行 TST 的位置激活白噪声发生器的总声级为 70-72 dB。但需要注意的是，这些数字仅作为示例提供，每个实验室应根据其*的环境和情况选择合适的噪音水平。

清洁用品

每次测试结束后，使用消毒溶液，*擦拭悬挂盒。

亚克力透明套管（可选）

为了有效防止小鼠在测试过程中长时间攀爬，可以使用亚克力套管套在小鼠尾巴上，再进行悬挂，具体方法可以参考以下视频，效果棒棒哒！

实验步骤

1、调节好相机，尽可能靠近动物，获得较高清晰度的视频

2、开启白噪声发生器，掩盖外部噪声。避免高音量，并确保所有动物使用相同级别的白噪声。

3、将待测小鼠带入测试房间适应，通常至少一小时。请注意，放置在同一个房间的其他动物可以感知嗅觉和超声波信号。

4、将胶带粘在老鼠的尾巴上。使用胶带的标记端并确保胶带粘在尾部并重新贴在自身上。胶带应贴在尾巴的最末端，在胶带外留下 2-3mm的尾巴。

5、以最短的时间，将胶带或者老鼠尾巴固定到悬尾箱顶部的挂钩上，因为过长时间的拖延会对小鼠有压力。

6、使用VisuTrack软件预先设置好的参数，实验采集分析6分钟。

7、将小鼠送回它们的饲养笼后，从收集盘中丢弃粪便和尿液，并用消毒溶液擦拭装置。

VisuTrack软件分析小鼠悬尾实验

实验“谜团”

1、小鼠悬尾实验测试时长通常为6分钟，与强迫游泳实验不同，小鼠在悬尾实验早期更容易表现出不动状态。

2、测试中，只有小鼠的前肢活动，但后肢未动的情况，一律视为动物摇摆不动行为（绝望状态）。

3、由于运动惯性，小鼠的类似“钟摆”活动也需要一律视为动物摇摆不动行为（绝望状态）。

4、悬尾实验较强迫游泳实验，没有因浸入水中而导致体温过低的风险，这2个实验在灵敏度和性能存在各种重要差异，并且一项测试的结果不一定会在另一项测试中复制。

实验差异，可参考这2篇文献：

• Cryan JF, Mombereau C, Vassout A. The tail suspension test as a model for assessing antidepressant activity: review of pharmacological and genetic studies in mice. Neurosci. Biobehav. Rev. 2005;29:571–625.

• O'Leary OF, Cryan JF. In: Mood and Anxiety Related Phenotypes in Mice. Gould TD, editor. Vol. 42. Humana Press; 2009. pp. 119–137.

5、TST 不建议使用体重较大的大鼠，因为这些动物仅靠尾巴支撑体重可能会很痛苦。同样，对于异常重的小鼠（例如用于模拟肥胖的小鼠）应谨慎，在这些情况下，实验者应寻找替代测试，例如强迫游泳测试。

6、预先用旷场实验测量小鼠的整体活动水平很有必要，可有效防止在悬尾实验中产生虚假结论。