细胞培养实验的血清如何挑选
时间:2024-08-05 阅读:184
一、什么是血清
血清,指血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。其中牛血清是重要的细胞培养添加成分,具有终止胰蛋白酶消化,提供细胞生长所需的贴壁因子、免疫球蛋白、胰岛素等其他营养物质的作用。
二、血清的分类与区别
根据采血时间的不同,牛血清通常分为胎牛血清(FBS)、新生牛血清(NCS)、小牛血清(BCS)、供体血清。
这四种有什么区别?
(1)采血方式不同:胎牛血清是母牛怀孕3-8个月时,采用剖腹心脏密闭穿刺取血;而新生牛血清、小牛血清和供体牛血清分别是取自新生牛(小牛)、成牛的血。
(2)血清成分不同:胎牛血清还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少;促细胞生长因子、促附因子、激素及其他活性物质等组分也不同于其他几类血清。
(3)用途不同:某些细胞的培养必须使用胎牛血清才行。如:干细胞、淋巴细胞、神经细胞等;而有些细胞需要小牛血清就可以,如肿瘤细胞等。使用浓度也不同,一般在10%-15%,有特殊要求的浓度在20%。
(4)颜色不同:血清根据血红蛋白含量的不同,表现的颜色也不一样。真正的胎牛血清凝血功能差,红细胞容易破裂,一般表现出微红色或橘色;而新生牛(小牛)血清则表现为蜡黄色或偏黄色。
(5)澄清度和粘稠度不同。胎牛血清中的蛋白和脂类含量低,表现为稀薄、清淡,而新生牛(小牛)血清相比更加粘稠。
理论上,优质的胎牛血清在细胞培养方面通常优于其他类型的血清,与新生牛和小牛血清相比,各类生长因子含量更为丰富。
但是由于胎牛血清价格相对较高,且不同实验对于血清的需求也不同,因此要综合考虑各实验室、生产企业的条件与所培养细胞类型等多方面因素。
另外,除了以往根据经验和文献报道,必要时也可进行针对特定细胞的血清筛选试验,以筛选出最佳血清。
三、血清如何正确保存?
血清在生产制备完成后,通过质量检测,然后被运送至市场上销售。整个过程中,包括运输流程,储存温度应严格保证在-20℃,避免反复冻融影响血清活性。
另外,实验人员在收到血清后一定要进行检查,确认完好后及时送至-20℃冰箱中储存,用时再取出解冻。如果一次无法用完一瓶,应该无菌分装后冷冻保存。注意避免反复冻融。
四、血清如何正确解冻使用?
首先将血清置于冰箱2-8℃中12-24小时,使之缓慢部分溶解,再放到室温下全溶。
注意:溶解过程中要每隔一段时间缓慢地摇动血清使之混匀。切记:避免37℃水浴。
另外,解冻后的血清,不宜在4℃冰箱中放置过久。