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细胞的说明培养流程和注意事项

时间:2018-11-20      阅读:2022

细胞接收后的操作流程与注意事项

1. 细胞收到后建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度,换液培养或传代。

2. 如果细胞为贴壁细胞,而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞及时离心,加15%血清的*培养基到新的培养皿/瓶中继续培养3天;同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的*培养基,培养2-3天。若3天后细胞都没有出现增殖而是继续脱落死亡,请及时联系实验室,技术人员会跟进解决。

3. 贴壁细胞生长缓慢:适当提高血清浓度(高不超过20%),或可根据该细胞生长密度,考虑胰酶消化后,转移到新的培养瓶继续培养。

4. 生长不均:贴壁细胞若出现生长不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重新打散细胞,加入新鲜培养基进行培养。

 

细胞常规培养传代流程(请严格遵守无菌操作)

1. 吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2~3 ml 0.25% EDTA的胰酶消化(注意把握消化时间,通常控制在1~2min)。

2. 镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁运动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml *培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落、吹散。

3. 取出部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的*培养基,于培养箱中培养。

4. 注意培养基PH值变化情况,定期换液,待细胞密度达到70-80%时重复传代操作或者冻存。

 

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