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慢病毒包装实验的制备程序

时间:2020-01-08      阅读:1034

慢病毒包装实验方法构建含有目的基因的慢病毒表达载体(GeneCopoeia可提供各种慢病毒载体的ORF、启动子、shRNA、miRNA前体和miRNA抑制剂克隆)细胞准备:细胞传代后,密度达到70%左右时进行转染;转染复合物制备:取两个EP管,一个(A管)加入慢病毒载体的表达质粒、混合包装质粒和Opti-MEMI;另一个(B管)加入Opti-MEMI、转染试剂,一边轻柔涡旋A管,一边往A管滴加B管的溶液。溶液混合后,室温放置10-25分钟,即完成转染复合物的制备。
细胞转染:将混合液逐滴加入细胞培养皿中,混匀后孵育;收集病毒:转染后48h、72h收集含慢病毒的上清;
慢病毒包装及检测工具:1.慢病毒包装工具细胞293Ta(LT008);2.慢病毒包装试剂盒(LT001);3.慢病毒浓缩试剂盒(LT007)

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