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鸡白痢鸡伤寒抗体检测试剂盒
鸡白痢(Pullorum Disease,PD)鸡伤寒(Fowl Typhoid,FT)抗体检测试剂盒检测鸡血清中的鸡白痢鸡伤寒抗体,用于鸡群的鸡白痢鸡伤寒的血清学辅助诊断。
本试剂盒采用间接ELISA法,在酶标板条微孔上预包被鸡白痢鸡伤寒抗原。在试验中,加入稀释后的待检血清,经过温育后,若样品中含有鸡白痢鸡伤寒特异性抗体,则与包被板上的抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后;再加入酶标二抗,与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶结合物;在微孔中加入TMB底物液,经酶催化形成蓝色产物,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。
组份
1 | 抗原预包被板条 | 1/2块 | 7 | 终止液 | 6/11ml |
2 | 酶结合物 | 11/21ml | 8 | 阴性对照 | 0.8/1.6ml |
3 | 10倍浓缩洗涤液 | 50ml | 9 | 阳性对照 | 0.8/1.6ml |
4 | 底物A液 | 6/11ml | 10 | 血清稀释 | 1/2块 |
5 | 底物B液 | 6/11ml | 11 | 封板膜 | 2/4张 |
6 | 样本稀.释液 | 50/100ml | 12 | 说明书 | 1份 |
需自备的设备及试剂
微量移液器: 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。
一次性移液器吸头。
量筒:500ml。
96孔板酶标仪。
蒸馏水或去离子水。
洗瓶或洗板机。
样品制备
取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。
洗涤液的准备
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
样品的稀释
在血清稀释板中按1:99的体积比稀释待检血清(例如:495μl样品稀释液中加5μl待检血清)。
注意:阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头,准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。
注意事项
试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用前应摇匀,使用后放回2-8℃。
不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。
底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。
TMB(底物B液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2~8℃)。
所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
严格遵守操作说明可以获得很好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。
血清稀释板为一次性用品,不得重复使用;血清稀释板的大容量为300μl/孔。
操作步骤
1. 取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性、阳性及空白对照各1孔,取阴性及阳性对照各100μl
分别加入反应孔中,空白对照仅加入100μl样本稀.释液。轻轻振匀孔中样品(勿溢出)。
2. 盖上封板膜,置37℃温育30分钟。
3. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250ul,加满液体后停留1分钟,后甩去孔内液体,以上步骤重复3次,后在干净吸水纸上拍干。
4. 每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。
5. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤3次, 方法同3。切记后在干净吸水纸上拍干。
6. 每孔先加底物液50µl、再加显色液50µl,混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。
1. 每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。
结果判定
以空白对照调零用酶标仪于450nm(630nm作参比波长)读取吸光度A值。试验成立的条件是阳性对照孔A450值大于或等于0.5,阴性对照孔A450值必须小于0.15。如果试验无效,试验中的操作值得怀疑,试验应重做,并仔细检察各组分。
样品A450值大于0.2+阴性对照孔均值,判为阳性;样品A450值小于0.2+阴性对照孔均值,判为阴性;如阴性对照孔均值小于0.05按0.05计算。
贮存方法: 2 - 8ºC下贮存。
有效期: 12个月。