将肺炎衣原体包被于微孔板→加入血清,使得抗原抗体结合→37℃育温1小时→洗去未结合的抗体→加入酶结合物→37℃育温1小时→洗去酶结合物→加入底物→加入终止液450nm→读取吸光值→结果计算

实验流程：2×50ul阴性对照、1×50ul阳性对照和稀释后的样本加入到微孔板里→37C育温1小时→洗液洗涤3次→加入50ulHRP酶结合物→37℃育温1小时→洗液洗涤3次→加入100ulTMB底物→室温平衡15分钟→加入100ul终止液→450nm读取吸光度→计算结果

操作步骤：

试剂准备：

1．所有试剂使用前混匀并平衡至室温。

2．洗液20倍稀释：如50ul浓缩洗液加入950ml水。酶结合物1:300稀释（如10ul加入300ul的稀释液）。

3．血清样本1:105稀释，如加入5ul的血清，加520ul的样本稀释液，或者采用两步法稀释，加入10ul病人血清，加入200ul样本稀释液，取出该稀释后的溶液25ul，再加入100ul的样本稀释液（阴性、阳性和标准品按以上比例稀释）。

4．每孔加入50ul的稀释后的液体（空白孔加入样本稀释液）。

5．封膜后，37℃育温1小时，拍干液体。

6．用稀释后的洗液每孔300-350ul洗涤3次。

7．拍干后加入酶结合物的稀释液50ul。

8．封膜后，37℃育温1小时，拍干液体。

9．重复第6步。

10．加入100ul底物，室温放置15分钟。

11．加入终止液100ul。

12．30分钟内检测450/620nm检测吸光度。 

检测的有效性：

检测结果必须符合下列条件，否则重新测试。

1．阳性对照吸光度值必须≥0.8（450nm读取吸光度）

2．阴性对照的平均值必须0.1＜NC≤0.4（450nm读取吸光度）