霍乱弧菌O139(VC O139)核酸检测试剂盒的操作使用
时间：2023-04-11 阅读：883
1、试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N（N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满10份，多配制 1份），每测试反应体系配制如下表：将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21μL/管。
2、加样（样本处理区）
将步骤1提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。
3、 PCR扩增（核酸扩增区）
3.1 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；
3.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；
荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光，选择None即可。
3.3 推荐循环参数设置：
4、结果分析判定
4.1 结果分析条件设定
设置Baseline和Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline的start值（一般可在3~15范围内调节）、stop值（一般可在5~20范围内调节），以及Threshold的Value值（上下拖动阈值线至高于阴性对照），重新分析结果。
4.2 结果判断
阳性：检测通道Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；
可疑：检测通道35值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为35值≤38，且曲线有明显的增长曲线， 判定为阳性，否则为阴性；阴性：样本检测结果Ct值>38或无Ct值。
5、质控标准
阴性质控品：Ct>38 或无Ct值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。