禽呼肠孤抗体检测-elisa酶联免疫试剂盒使用说明书

【用途】

用来检测鸡血清中的禽呼肠孤病毒抗体

【试验原理】

禽呼肠孤病毒被认为与病毒性关节炎、发育迟缓综合征、呼吸系统疾病、肠热病、吸收障碍综合症和骨质疏松有关，从未发病的鸡中也可分离到呼肠孤病毒，根据宿主日龄、毒力和接触病毒途径的不同，病毒诱发疾病的的性质、症状和严重程度也不同，鸡血清中的禽呼肠孤病毒抗体水平及整个鸡群的免疫状况可用方法进行监测。

将灭活的抗原包被在微孔板上，加入稀释后的血清并孵育。血清中的所有抗REO抗体将与微孔板上的REO抗原结合并形成REO抗原抗体复合物，然后洗掉未结合的物质，加入碱性磷酸酶标记的抗鸡的（结合物）至微孔板中，结合物将与抗原抗体复合物结合，孵育后洗掉未结合的结合物，加入底物溶液。底物与碱性磷酸酶发生反应形成黄色的物质。后，终止反应，将颜色固定。颜色的深浅可用酶标仪（405-410nm）测定。

【主要组成成份】

【储存条件及有效期】

1.2~8℃避光保存，防止冷冻，有效期为12个月。

2.包被板开封后2~8℃避光保存，使用期限为15天。

【适用仪器】

含450nm和630nm波长酶标仪；37℃恒温设备；可调微量移液器。

【样本要求】

1. 为取得实验效果，避免使用含叠氮钠、高血脂、长菌以及严重溶血的样品；

2.短期（7天）将进行检测的血清样品可存放于2～8℃；如需长期保存，应置于-20℃或以下，避免反复冻融。

【检验方法】

1. 洗涤液配制：用蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液（2号液）按1：10稀释（如取50ml浓缩液与450ml蒸馏水或去离子水），充分混匀即为工作洗涤液。

2.样本稀释：用样本稀释液（5号液）将待检血清按1:100稀释（如5μl血清＋495μl样本稀释液），充分混匀。 阴性、阳性对照品不用稀释，直接加样。

3.加样反应：每次试验设阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔（分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液100μl）。样本检测孔每孔加已稀释血清样本100μl。37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体，每孔注满工作浓度洗涤液洗涤3次，每次均需停留1分钟；后一次甩净，拍干。

4.加酶反应：除空白对照孔外，其余每孔加酶结合物（1号液）1滴，37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体，如上洗涤，拍干。

5.显色反应：加底物（3号液）和显色剂（4号液）各1滴，混匀，37℃下避光显色10分钟。

6.终止反应： 加终止液（6号液）1滴，以空白对照调零，用酶标仪于450nm波长（630nm作为参比波长）读取OD值。

【参考值】

1.Cut-off 值 (COV)=阴性对照平均OD值×2.1 (阴性对照孔OD值＜0.08时按0.08计)。

2.有效性判定：

空白对照孔OD值＜0.05（若大于0.05则实验无效）；

阴性对照孔OD值≤0.10（若大于0.10则实验无效）；

阳性对照孔OD值≥0.30（若小于0.30则实验无效）。

【检验结果的解释】

样本OD值≥COV值时，判为病毒抗体阳性；

样本OD值＜COV值时，判为病毒抗体阴性。                        

【检验方法的局限性】本试剂仅适用于检测鸭血清。

【禽呼肠孤抗体检测-elisa酶联免疫试剂盒注意事项】

1.包被板须密封防潮。从冷藏环境中取出时，应平衡至室温后，方可开封启用。未使用完的板条应即时放回有干燥剂的自封袋中，4℃密封保存。

2.滴加试剂前应将滴瓶轻摇、混匀，首滴弃去；滴加试剂时瓶身应保持竖直。

3.瓶盖每次使用后要盖紧，各瓶盖之间不可混用。不同批号试剂盒的试剂组份不可混用。

4.孵育时，推荐使用水浴箱。如无水浴箱，可取密封湿盒放入37℃温箱内使用。

5.用弃的试剂盒及样本都应按污染物妥善处理。试剂盒内终止液有腐蚀性，须小心使用。