一、什么是色谱呢?

色谱的本质是一种分离分析方法。常见的分离方法有蒸馏、离心、电泳、过滤等。色谱是目前有效的分离方法之一。

色谱法的原理：

利用混合物中各组份在不同的两相中溶解、分配、吸附等性质的差异，当两相作相对运动时，使各组分在两相中反复多次受到各作用力而达到相互分离。

两相中有一相是固定的，叫作固定相(Stationary Phase)，有一相是流动的，称为流动相(phase)，流动相又叫洗脱剂、溶剂。

相(Phase)：物理化学术语，特指在某一系统中，具有相同成分及相同物理、化学性质的均匀物质。各相之间有明显可分的界面。

二、液相色谱仪的组成

1、输液系统

包括溶剂柜、真空脱气机、溶剂混合器、高压泵等，其中核心部分是泵；泵的作用提供足够的驱动力使流动相通过填充紧密的色谱柱。

洗脱方式也分为两种：

（1）等度洗脱：在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。

（2）梯度洗脱：采用两种（或多种）不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续改变流动相的浓度配比和极性的一种洗脱模式。用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。

2、进样系统

把分析试样有效地送入色谱柱进行分离。一般有自动进样器和手动进样器，进样量应不小于定量环体积的5-10倍（少3倍）。

3、分离系统

主要是色谱柱，色谱柱是一根装满填料的管子。色谱柱的材料有不锈钢、塑料、玻璃等，其尺寸（内径、长短）不尽相同；色谱柱填料主要有硅胶基质和聚合物基质，填料的粒径不尽相同。

4、检测器

对检测器的要求：灵敏度高、重现性好、线性范围宽、死体积小、对温度及流量的变化不敏感等。主要有紫外检测器、荧光检测器、示差检测器等。

示差检测器是一种通用型检测器，理论上可以检测几乎所有的化合物。其原理是基于含样品的洗脱剂和洗脱剂二者折光指数的差异。示差检测器受压力变化、温度变化、流动脉冲的影响较大，不适合进行梯度洗脱。

三、液相色谱仪操作流程

1、开机：依次打开脱气机、色谱泵、检测器、计算机电源；待各设备自检正常后，启动色谱管理系统。

2、流动相准备：过滤，脱气。

3、色谱泵排气

4、安装色谱柱

5、平衡流动相（有机溶剂与缓冲盐溶液切换时等易产生沉淀，需先使用90%超纯水/10%甲醇作为流动相冲洗系统）

6、数据采集、进样

7、冲洗管路及色谱柱

8、数据处理

9、关机

10、记录相关信息

四、液相色谱图名词术语

色谱峰(Peak):色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号。

峰底(Peak Base):峰的起点与终点之间连接的直线。

峰高(Peak Height):峰大值到峰底的距离。

切线峰宽(Peak Width):在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离。

半(高)峰宽(Peak Width at Half Height):通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之间的距离。

峰面积(Peak Area):峰与峰底之间的面积，又称响应值。