透析袋的预处理和存储方法
时间:2021-05-19 阅读:3760
为防干裂,出厂前透析袋一般都经10%的甘油处理,透析袋中含有微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其他生物活性物质有害,用前必须除去。新购进的普通型透析袋必须经过处理才能使用。
一、透析的原理
透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。
二、透析袋的预处理
方法一:
把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段。
在大体积(500ml)的2%(w/v)的碳酸氢钠和1mmol/L EDTA2Na(pH=8.0)中将透析袋煮沸10min。
用蒸馏水*清洗透析袋。
放在500ml的1mmol/L EDTA2Na(pH=8.0)中将之煮沸10min。
冷却后,置于30%或者50%的酒精中,放于4℃冰箱,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时其取用透析袋必须戴手套。
在使用前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗干净。
方法二:
可先用50%乙醇煮沸1h,再依次用50%乙醇、0.01mol/L碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH=8.0)溶液洗涤,最后用蒸馏水冲洗即可使用。
方法三:
实验要求不高的可以用简易方法处理。用沸水煮5至10min,再用蒸馏水洗净,即可使用。
不过现在也有杂质含量极少,无需预处理,只需用去离子水清洗即可使用的即用型透析袋。这种透析袋具有特殊的生物技术膜,不含硫化物及金属杂质。只是比普通型透析袋稍贵。
三、三种不同类型的透析袋
普通型透析袋
1.把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段;
2.在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸10分钟;
3.用蒸馏水*清洗透析袋;
4.放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸10分钟;
5.冷却后,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套;
6.用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净;
再生纤维素透析袋:
此类型透析袋可耐受pH范围是2.0~12.0;耐受温度是4~60℃;不能煮,也不需要煮,只需用纯水*冲洗即可。
纤维素透析袋:
此类型透析袋可耐受pH范围是2.0~9.0;耐受温度是4~37℃;不能煮,也不需要煮,只需用纯水*冲洗即可。
三、透析袋的选择
1.确定透析袋的分子量
在选择适合截留分子量之前,首先要明确:欲保留在透析袋中的样品和想要除去的杂质的分子量。
2.选择普通型,再生型,or纤维素透析袋
确定好分子量之后,根据实际情况,样品溶剂等,选择透析袋。
3.正确选择扁平宽度
透析袋扁平宽度的选择取决于样品体积和透析容量。较小的透析管透析更快;较大的透析管因扩散距离较长透析较慢。为易于使用,建议使用总长(包括闭合夹和顶部空间)为大约10-15cm的透析袋。
四、透析袋的使用
下述透析程序是一个普遍的基础透析过程。在开始透析之前应考虑到许多变数。透析样品溶剂、膜的化学相容性、膜的截留分子量,透析溶剂、透析体积、温度等变量都会影响透析速率,因此,一些应用中下述透析过程可能需要适当的变化。
1.把适量的透析液(缓冲液)加入透析装置。透析液的体积应为样品体积量的100倍。(例如:在一升透析液中透析10毫升的样品)
2.裁剪适当长度的透析管。预留一段额外长度(约占总样品体积量的20%)作为头部空间。
3.把透析管插入打开的透析夹,在约超出透析夹3-5毫米的位置再夹住,不要折叠透析袋。
4.由透析管开口端将样品装入。调整一下顶部空间的长度,夹紧透析夹。
5.把透析样品放在合适的透析缓冲液中。
6.透析要根据具体的应用需求。通常情况下,允许过夜透析。在持续透析的过程中,至少要进行3次全部更换透析液。建议在(透析后)2-4小时,6-8小时和10-14小时(第2天早晨)更换透析液。在最后一次透析液的更换后要至少继续进行2小时的透析。
五、透析袋的存储
1.透析袋不能在纯水中长期储存,会长菌,用0.05%die氮化钠溶液储存。
2.样品按推荐的单位长度容量加样,不可多加,样品浓度不可太大,否则容易导致膜涨破。
3.样品和透析液体积比一般是1:50~500
4.对于高浓度污染物,样品可能需要较长的时间透析,透析液需要更频繁的更换。
5.透析温度主要取决于样品。温度限制主要取决于膜的类型。纤维素透析袋可以承受的温度高达37℃,再生纤维素透析袋可以承受的温度高达60℃。
六、使用注意事项
在适当的储存情条件下,保质期为两年。干燥的透析袋要在室温或4℃储存在聚y烯袋中。一旦变湿,透析袋应浸泡在下列之一的溶液中:0.05%die氮化钠,1%苯jia酸钠或1%甲醛。(备注:一旦变潮湿,不要让透析袋干燥。不断干燥会造成孔隙结构不可恢复的倒塌)