制作标准曲线

1、计数，按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做5-7个细胞浓度梯度，每组4-6个复孔。

2、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后每100μL培养基加10uL CCK-8（注意不要在孔中生成气泡，会影响OD值）试剂培养一定时间后测定OD值，在细胞培养箱内继续培育1-4小时。用酶标仪测定450nm处的吸光度。

计算所需培养液

可以先转染再种板

在10cm盘转染，6h后消化，重悬细胞，技术，调细胞密度为20000个/ml，种在96孔板，每孔1000μL。

种板时，枪头吹吸细胞，重悬，均匀分散。也可以转染和种板同时进行，转染6h后换液，每孔100μL新鲜DMEM。

细胞增殖-毒性检测

(细胞活性检测不进行2、3步骤)

1、在96孔板中接种细胞悬液(100uL/孔，每孔细胞数至少1000)，将培养板放在培养箱中预培养24小时;

2、向培养板加入不同浓度的待测药物;

3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间；加培养基(完培，基培皆可)，孵育6小时（具体按各自试验决定），空白孔记得加培养基。

4、向每孔加入10μL的CCK-8溶液(注意不要产生气泡);(不用更换培养基)直接加

5、将培养板置于培养箱内孵育1-4小时; f.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。