ELISA基于特异性抗原抗体反应，通常用到的是固相酶联免疫吸附方法，这里以最常使用的夹心法为例，其基本步骤为：

将包被抗体固定在微孔板表面

从板上洗去未被结合抗体

加入质控抗原或含有目标物的样本

洗去其他杂蛋白，加入标记的检抗

添加酶特异性底物，产生有色产物，使用酶标仪进行比色测定即可

辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶是ELISA中常用的酶，而底物包括四甲基联苯胺(TMB)或2, 2'-叠氮基-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)。通常选择重复或三次采样，并且使用不同浓度的样品以确保生物学上可接受的检测范围。