1、主要怀疑点：洗板不充分：

1.1、机器洗版：确保机器设置的针头能吸干孔中液体，并且加液针头能加液大于350ul，加液针头没有被异物或者结晶盐堵住。

1.2、手动洗板，严格按照步骤，使用干净灭菌的枪头和加样槽，使用无氧化剂的吸水纸。加350ul洗液，静置90秒，在吸水纸上拍干孔中液体后再加入下一步洗液或者试剂。

1.3、特别注意，在加入TMB前的洗板步骤极其重要，残留的HRP酶会直接导致TMB显色。

2、次要怀疑点：

2.1、TMB 已经污染，检测TMB是否透明无色，如果偏蓝就是污染了。

2.2、检查配制洗液的水是否污染，要求使用的水是双蒸水，三蒸水或无离子水，水中的Fe3+,Cu3+,Co3+等过渡金属，以及HClO都会氧化TMB。

2.3、酶标板受潮，长霉，或者试剂过期。

2.4、环境污染，空气中有导致显色的物质或者粉尘。