产品介绍：

提取冷冻的抗凝血的DNA

产品及特点

血液 DNA 是重要的研究材料，但是血液 DNA 在常温下存放的时间很短，

因此很多血液样品都是冻凝存放。由于冻存过程中形成的冰晶会刺破细胞膜，释

放出 DNA，因此从冻存血液中高效提取 DNA 一直是个棘手的问题。本产品就

专门用于从冻存血液中提取 DNA 的试剂盒，它具有下列特点：

1. 适用于各种动物血液，包括禽类和昆虫。

2. 微量提取，每次可处理 400 μL 血液。

3. DNA 完整性好，纯化后长度在 20-50 Kb 之间。

4. DNA 纯净，OD260/OD280 在 1.8-2.0 之间，可直接用于 PCR、酶切、

杂交等实验。DNA 产量一般在 10 μg/mL 血液。

5. 操作简单，整个过程约 20 分钟，室温操作，适合大规模样品处理。

运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂

使用方法 1. 从-20℃或更低的冰箱中取出血液样品，室温下静置融化。

2. 将 400 μL 解冻的血液转移到一个 1.5 mL 的塑料离心管中，加入 400 μL

溶液 A，充分震荡混匀。如果是禽类血液，则少加 10 倍，只加 40 μL。

3. 在混合液中加入 400 μL 溶液 B 和 200 μL ，振荡 1 分钟。由

于离心管比较满，所以需要确保管底溶液转动起来，否则只是液面振动而已。

4. 4℃12000 g 离心 10 分钟，小心将上清转移至一新的 1.5 mL 塑料离心管

中。注意：不要室温离心，如果室温离心，则离心后部分样品的中间白

色层可能会很厚，只能得到很少的上清。

5. 将约 0.7-0.8 mL 上清转移到 10-15 mL 塑料离心管中（不要使用玻璃离心

管，否则 DNA 会吸附到管壁上。常用的培养提质粒用的细菌的培养管即可）。

6. 加入 2.5 倍上清体积的溶液 C（2 mL），立即摇晃混匀。

7. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次 0.7 mL 左右，转移后静置 2-5

分钟，以使 DNA 与膜充分结合，然后室温 12000 g 离心 30 秒，弃收集管

中的废液，然后再加入 0.7 mL，重复上述操作，直到全部混合液挂柱。

8. 在离心吸附柱中加入 0.7 mL 通用洗柱液，室温 12000 g 离心 30 秒，弃收

集管中的废液。

9. 在离心吸附柱中再加入 0.3 mL 通用洗柱液，室温 12000 g 离心 30 秒，弃

收集管中的废液。

10. 室温 12000 g 离心 30 秒，去尽残留液体（此步骤十分重要，不要省略，

否则残留的含乙醇的通用洗柱液将抑制后续的酶反应）。

11. 将离心吸附柱置于一新的 1.5 mL 塑料离心管中，加入 50 μL DNA 洗脱液

2.0，室温放置 2 分钟。如果将 DNA 洗脱液 2.0 在 65℃预热后再使用，洗

脱 DNA 的效果更佳。

12. 室温 12000 g 离心 30 秒，离心管底部溶液即 DNA 溶液，可立即使用或

-20℃长期保存。

13. 本产品所用离心吸附柱吸附能力比较强，如果再次用 DNA 洗脱液 2.0 洗脱，

还能洗脱下一些血液 DNA。

疑难解答 Q：保存血液样品时温度越低越好吗？

A： 不是。Tegelstrom 曾经比较了分别在-70℃, -20℃, 4℃保存了 6 个月的蛙

血，发现保存温度越低，血液 DNA 的断裂越严重（详见 Tegelstrom, 1989.

Cold room Storage of blood may be better than storage at -70℃.

Fingerprint News, 4:5-6）。

Q: 本产品是否可以用于放量操作？

A: 可以在大的离心管中进行放量操作，如每次处理 5-100 mL 血液，只是客户

需要单独购买红细胞裂解液，并按比例增加溶液 A 和溶液 B 的用量。

Q: 冷冻血液为何 DNA 产量很低？

A: 冷冻过程中形成的冰晶刺破了细胞膜和细胞核膜，红细胞裂解液处理时释放

的 DNA 将进入上清并丢失，所以后得到的 DNA 是没有被冰晶刺破的细胞

的 DNA。