有不少用户提出关于VHP灭菌生物指示剂的D值范围的疑问，对此，我们综合看了法规并与制造商技术人员进行了讨论。

首先我们要记住的是，任何BI的D值都是孢子固有的抗性与载体+包装材料相结合的结果。在同一产品线中进行测试时，不同的孢子可能会有不同的表现。此外，在蒸汽、干热或环氧乙烷工艺中，D值的变化率为20%，而汽化过氧化氢 (VHP) 工艺中，D值的变化率可能超过50%

对于环氧乙烷、干热和蒸汽灭菌等工艺，我们使用ISO 11138和USP中规定的D值限值。但是，VHP生物指示剂并不存在此类规范。因此，如果行业和监管机构没有制定”可接受的”抗性规范，我们不倾向于对用于VHP灭菌效果验证的生物指示剂规定什么是可接受的抗性，什么是不可接受的抗性。

我们从以下几个方面来阐述为什么汽化过氧化氢生物指示剂没有D值标准

  1、 抗力测定

在蒸汽、环氧乙烷和干热灭菌测试中，对抗力仪有明确的要求。从本质上讲，两个不同的实验室都拥有并操作符合ISO标准的抗力仪是可行的，当测试同一批BI时，可能会得到相似的抗性结果。VHP测试系统则不同，因为存在不同的商业系统 (如“干”系统、“湿”系统、“微冷凝”系统)，每个客户都有自己的要求。我们经常遇到想要0.5 分钟 D值的客户，而其他客户则认为如此低的D值对他们的特定系统来说并不是一个重大挑战。

2、 旧版USP法规

在旧版的USP中规定，评估汽化过氧化氢生物指示剂的标准物理条件尚未确定。不同的设备制造商提出了不同的净化或灭菌条件。因此，汽化过氧化氢净化或表面灭菌并没有标准流程。由此可见，目前尚无行业标准的汽化过氧化氢生物指示剂的评价方法。此外，在汽化过氧化氢存在的情况下，很难准确地评估相对湿度(通常被定义为关键工艺参数) 。因此，更合理的做法是将生物指示剂的抗性作为厂商提供的相对或比较性参考指标，而不是真正的D值。根据所采用的设备和技术工艺，使用方可能无法模拟厂商的测试技术，进行生物指示剂抗性检测。

3、 现行USP<1229.11>

现行USP<1229.11> 汽相灭菌中也有规定，汽化过氧化氢灭菌工艺是利用悬浮在空气中的过氧化氢(蒸汽) 进行灭菌，在室温下，过氧化氢是液体，可以汽化以引入容器或腔室。它们与灭菌气体和液体的不同之处在于，在灭菌过程中，容器内存在多个阶段。蒸汽灭菌系统非常适合热敏性材料和表面灭菌。暴露在灭菌过程中的物品应尽可能暴露其表面。蒸汽灭菌过程需要适当的过氧化氢浓度、温度和相对湿度，这些因素在暴露期间都可能发生变化。这些参数的变化可能会导致待处理表面相对湿度、过氧化氢浓度和冷凝率的局部差异，从而影响到工艺的灭菌效果。有报道称气相条件、表面条件和微生物杀灭之间没有明显的相关性。因此，不能把在线监测气相浓度作为控制参数。而且VHP汽化过氧化氢灭菌工艺是一个气液共存的过程，所以无法开发出标准化的生物指示剂，适当的生物指示剂(BI)和耐药性的选择应基于用户系统内的实验。只有在定义明确的特定条件下 (如药剂浓度、湿度、温度、基材和相位)，才能确定可靠的 D值。

4、 “液气”共存

正如现行USP<1229.11>中提到的，由于灭菌剂在灭菌过程中具有不同的相位和多相性质，标准灭菌条件尚未确定。因此，不存在可用于杀灭率常规预测分析的具有D值的标准化BI。在没有D值的情况下，由于蒸汽灭菌循环参数的变化，必须使用经验方法。构成蒸汽的气相和液相的杀灭率可能会有很大不同 (液相杀灭率被认为大于气相杀灭率)。我们可以调整灭菌工艺参数(通常是时间)，直到实现杀灭。这就确定了杀灭所票的条件。