本生生物带您了解ELISA试剂盒实验重要的步骤
时间:2020-04-20 阅读:1219
本生生物带您了解ELISA试剂盒实验重要的步骤
elisa试剂盒是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。虽然elisa试剂盒的操作步骤看似简单,但没做到位的话就会影响实验的效果。所以elisa试剂盒实验时至关重要的步骤有:
一、重要的洗涤
不充分的洗涤会导致差异和高背景,从而带来不理想的实验结果。如果未结合的材料残留在微孔板中,那么它会增加背景噪音。有必要的话,可增加洗涤液中的盐浓度,这会阻止非特异结合反应。如果背景过高,怀疑洗涤不够时,可以尝试增加洗涤次数。
二、关键的封闭
封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。如果背景过高,怀疑封闭不充分,那么可以尝试使用更高浓度的封闭液,或适当延长封闭时间。
目前主要有两种类型的封闭液:蛋白和非离子型去污剂。使用的类型须取决于多个因素,包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合,但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。
三、抗体浓度须优化
如果试剂稍有不同,则可能需要优化抗体的量。非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点,切勿使用过多的一抗或二抗。
四、检测试剂要适量
切勿使用过多的检测试剂。如果浓度过高,或者未正确稀释,则会导致高背景。也不要显色过度,如有必要,优化一下何时应加入终d止液。
只有确保每一步操作都做到位,才会呈现完美的实验结果。所以elisa实验的每一步都很重要,不可以掉以轻心。