血清干货分享：胎牛血清使用中会出现哪些问题

　　常见问题：

　　如何储存和解冻胎牛血清?

　　胎牛血清中为什么会产生絮状沉淀?如何避免?

　　胎牛血清的热灭活?

　　细胞培养中出现黑点该怎么做?

　　小牛血清和胎牛血清有何区别?

　　1、如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?

　　将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。

　　长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。

　　我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

　　2、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理?

　　沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清(400g，1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。

　　3、如何避免血清中产生沉淀?

　　按如下操作可避免沉淀的产生：

　　(1)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。

　　(2) 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。

　　(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

　　(4) 勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。

　　(5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

　　(6) 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

　　4、培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗?

　　一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

　　5、为什么要热灭活血清?

　　加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学 研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

　　6、有必要做热灭活吗?

　　实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。

　　而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物 的分裂扩增。

　　若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量!

　　7、细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?

　　一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

　　如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：

　　(1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸;

　　(2)血清质量不好，反复冻融的结果;

　　(3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;

　　(4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;

　　(5)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

　　8、细胞培养中如何防止黑点生成?

　　(1) 尽可能地减少血清冻融次数。

　　(2) 培养基无需37℃水浴。

　　(3) 培养基保持最佳PH值7.0-7.2。

　　(4) 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。

　　(5) 掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。

　　9、小牛血清和胎牛血清有何区别与注意事项?

　　(1)来源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

　　(2)组份与比例不同：两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等

　　(3)用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。

　　10、血清保存和使用须注意

　　血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。

　　解冻血清时 ，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。

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